Antegrade Perfusion Model: 고립된 마우스 심장을 관류하는 생체 외 기술

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취된 마우스를 바로 누운 자세로 놓는 것으로 시작합니다. 흉강을 해부하여 심장을 시각화합니다. 넓은 구경의 팁이 장착된 피펫터를 사용하여 흡입 압력을 가하고 마우스 몸에서 팁으로 심장을 흡인합니다. 대동맥의 심장을 절제하여 쥐의 몸에서 채취합니다.

분리

된 심장을 항응고제가 보충된 영양이 풍부한 완충액이 들어 있는 비커에 담그십시오. 완충액의 항응고제는 심근 세포인 심근 세포에 존재하는 칼슘과 복합체를 형성하여 심장 근육의 수축을 멈추고 혈액 응고를 방지합니다.

다음으로, 적절한 완충액이 들어 있는 페트리 접시에 보관된 하트 스탠드에 심장 정점이 아래로 향하도록 놓습니다. 심방 위의 대동맥을 고정하고 고정된 심장을 관류판으로 옮깁니다.

그런 다음 적절한 관류 완충액이 포함된 주사기-바늘 어셈블리를 사용합니다. 심실을 관통하는 좌심실에 바늘을 삽입합니다.

대동맥이 고정된 상태에서 뇌실내 주사는 대동맥 판막에 압력을 가하여 엽니다. 결과적으로 완충액은 관상 동맥을 통해 혈액을 순방향으로 씻어내어 심장 근육을 철저히 관류합니다. 마지막으로 완충액은 폐정맥을 통해 분출됩니다. 이는 다운스트림 응용 분야에 성공적으로 관류된 심장을 제공합니다.

마우스 심장 채취의 경우 안락사를 확인하고 복부를 면도한 후 신속하게 흉강을 열어 심장을 노출시킨 후 팁이 심장 크기와 거의 맞도록 절단된 플라스틱 이송 피펫을 사용하여 심장을 피펫으로 빨아들입니다. 피펫을 들어 올려 구부러진 가위를 삽입할 수 있는 충분한 공간을 만들고 가위를 사용하여 심방이 손상되지 않도록 주의하면서 등쪽에서 심장을 절제합니다.

즉시 심장을 얼음처럼 차가운 CIB EGTA가 들어 있는 30밀리리터 유리 비커에 약 1분 동안 넣습니다. 수축이 멈추면 얼음처럼 차가운 CIB EGTA가 들어 있는 35밀리리터 배양 접시에 심장을 넣고 폐와 기타 눈에 보이는 조직을 제거합니다.

대충 세척된 심장을 식힌 CIB EGTA로 채워진 심장 스탠드에 정점이 아래로 향하도록 놓고 스탠드를 입체 현미경 아래에 놓습니다. 대동맥 주변의 지방과 결합 조직을 제거합니다. 절단된 대동맥의 길이가 너무 길면 상완두동맥 바로 아래의 대동맥을 다듬고 전면이 앞쪽을 향하도록 심장의 방향을 잡습니다. 핀셋을 사용하여 대동맥 끝을 들어 올리고 작은 혈관 클램프를 사용하여 심방 근처의 대동맥을 고정하면서 심방을 부드럽게 아래로 누릅니다.

그런 다음 고정된 심장을 앞쪽이 위를 향하도록 관류판에 놓고 C