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생물학
0 조회수 • 4:19 분 • July 8th, 2025
시작하려면 안락사된 마우스를 바로 누운 자세로 고정합니다. 흉벽을 통해 측면으로 절개하여 흉강에 접근하고 심장을 노출시킵니다. 우심방을 절제하고 좌심실에 식염수를 주입하여 심장에서 혈액을 배출합니다.
주요 혈관을 절단하여 혈관 연결을 끊습니다. 또한, 가압 도관 역할을 하는 심실-동맥 접합부에서 적절한 거리에서 폐동맥을 절개합니다. 심실을 제거하여 심실 쪽을 대기압에 노출시킵니다.
이제 가압 튜브를 폐동맥에 고정하여 심실-동맥 접합부와 튜브 끝 사이에 적절한 간격을 확보하여 가압 중에 판막 첨단지가 움직일 수 있도록 합니다.
튜브에 밸브의 동맥 쪽에 적용할 원하는 정수압을 기준으로 폐동맥 판막에 대해 계산된 높이에 고정된 식염수로 채워진 저장소를 연결합니다. 정수압이 가해진 동맥 측의 단방향 흐름은 판막 전단지를 닫고 폐간을 팽창시킵니다.
그런 다음 적절한 고정제를 저장소에 도입하고 관류를 계속합니다. 관류 고정액은 세포 형태와 조직 구조를 안정화시킵니다.
고정액을 적신 거즈를 티슈 위에 올려 판막 주변의 티슈를 고정하고 건조를 방지합니다. 고정된 심장 판막을 사용할 때까지 고정제에 보관하십시오.
가는 가위, 마이크로 겸자, 미세혈관 클램프, 클램프 적용 겸자, 마이크로 바늘 홀더, 스프링 가위 및 견인기를 포함하여 마우스 해부에 필요한 도구를 고압멸균하는 것부터 시작합니다.
성체 C57 Black 6 마우스를 안락사시킨 후 트레이 위에 등쪽으로 누운 자세로 놓고 팔다리를 테이프로 고정한 후 개흉술을 시행한다. 과도한 지방 조직과 근막을 제거하여 심장을 노출시킨 다음 우심방을 제거하고 실온 식염수로 좌심실을 관류합니다.
상대정맥, 하대정맥, 폐동맥, 대동맥을 절단하여 심장 전체를 제거하고 가압 도관 역할을 할 심실-동맥 접합부 위 약 2mm를 절단합니다.
좌심실과 우심실을 제거하여 챔버를 대기압에 노출시켜 심실을 제거해도 폐동맥 구조가 영향을 받지 않도록 합니다. 폐동맥과 문합 가압 튜브는 전단지와 폐간의 큰 움직임을 수용하기 위해 부비노-세뇨관 접합부와 튜브 끝 사이에 약 1mm의 거리를 남깁니다.
저장소를 유사한 생리학적 압력으로 올리고 식염수로 채웁니다. 흐름 시스템을 테스트하여 막힘이나 기포가 없는지 확인하십시오. 문합된 폐동맥 판막에 마개를 부착하고 유출관을 전환하여 튜브를 통한 적절한 흐름을 보장합니다. 흐름이 충분해지면 유출을 문합된 폐동맥 판막으로 전환하고 몸통 팽창으로 식별되는 폐동맥 몸통의 압력을 보장합니다.
폐동맥의 가압을 확인한 후 식염수 저장소 용량의 25%가 퍼지될 때까지 점차적으로 1차 고정액을 통합합니다. 건조를 방지하기 위해 고정액을 적신 거즈를 조직 샘플 위에 놓습니다. 고정액을 3시간 동안 관류하고 일정한 압력을 유지하기 위해 저장소를 다시 채웁니다.
관류 후 심장 판막을 사용할 때까지 섭씨 4도의 고정액에 최대 1주일 동안 보관하십시오.