JoVE 실험 백과사전
생물학
0 조회수 • 2:48 분 • July 8th, 2025
쥐 모델의 대장내시경 유도 생검은 결장의 상처 부위를 유도합니다. 이러한 상처 침대는 위장관 또는 위장관의 염증성 질환에서 상처 치유 과정을 이해하기 위한 분자 및 조직학적 연구를 위해 분리됩니다.
상처 침대 격리를 시작하려면 대장내시경 유발 상처가 있는 안락사된 실험 마우스를 누운 자세에 놓습니다. 복부 피부와 밑에 있는 근육을 절개하여 체강을 노출시킵니다.
닫힌 가위를 결장 아래에 놓고 들어 올립니다. 결장을 중간 지점에서 자르고 항문을 잘라 몸과 분리합니다. 대변 내용물을 제거하기 위해 적절한 완충액으로 결장을 세척하십시오.
결장을 여과지 위에 놓고 장간막면이 여과지 위에서 아래를 향하도록 세로로 자릅니다. 이제 결장 위에 메틸렌 블루 염료를 넣고 현미경으로 관찰합니다.
염료는 상처 부위의 죽은 조직과 과립 조직을 염색하여 주변의 건강한 조직보다 더 어둡게 보이게 하여 쉽게 식별할 수 있도록 합니다. 유전자 발현 연구를 위해 분리된 상처 침대를 보존합니다.
적절한 실험 종점에서 피부와 복부 근육층을 열어 실험 동물의 체강을 노출시키고 닫힌 겸자를 결장 아래에 놓습니다. 결장을 부드럽게 들어 올려 밑에 있는 장간막에서 풀어주고, 중간 지점과 항문에서 조직을 절단하여 마우스로부터 수집합니다.
얼음처럼 차가운 PBS로 채워지고 쥐 위관 바늘이 장착된 20밀리리터 주사기를 사용하여 대변 내용물을 씻어냅니다. 그리고 깨끗한 결장을 여과지 위에 놓습니다. 장간막 쪽이 여과지에 대고 아래로 향하도록 주의하면서 결장을 세로로 열고 파스퇴르 피펫을 사용하여 점막을 0.2% 메틸렌 블루로 덮습니다.
몇 초 후 여분의 얼룩을 배출하고 해부 현미경으로 결장을 관찰하여 상처 부위를 찾습니다. 4인치 마이크로 홍채 가위를 사용하여 근육층을 자르지 않도록 주의하면서 침대 가장자리 주위를 자르고 가는 핀셋을 사용하여 해부된 조직을 튜브로 옮겨 스냅 냉동 및/또는 보관합니다.