Mouse Proximal Colon loop Model의 생성: 내강내 주사 후 혈청 내 형광 마커를 검출하여 근위 결장 루프를 생성하고 장 투과성을 측정하는 수술 절차

병리학적 상태에서 손상된 장 상피 밀착 접합 장벽은 유해한 내강 내용물이 전신 순환계로 침투하는 것을 증가시켜 전신 염증을 증가시킵니다.

장 근위 결장 루프 또는 pcLoop 모델을 생성하여 장 투과성을 평가하려면 마취된 마우스를 누운 자세로 준비합니다. 정중선 복부 절개를 수행합니다. 맹장, 회장 말단 및 근위 결장을 부드럽게 외부에 펴고 젖은 거즈 위에 올려 장기 수화를 유지합니다.

근위 결장의 중결장(혈관을 포함하는 복막의 막 주름)을 찾습니다. 결찰할 혈관이 없는 중결장에서 적절하게 분리된 두 부위를 식별하고 맹장에서 원위부에 있습니다. 사이트에 구멍을 뚫습니다.

선택한 부위에 결찰을 만들고 결찰된 부위 가까이에서 절개하여 혈액 공급을 방해하지 않고 pcLoop 세그먼트를 분리합니다. 분열을 완충액으로 세척하여 배설물을 제거합니다.

플러시된 부분의 절단된 끝을 외과적으로 묶습니다. 원하는 형광 마커 용액을 결장 분절 내강에 주입합니다. 장기를 복강으로 되돌립니다. 수술 절개 부위를 닫고 마우스가 회복되도록 합니다.

주사 후, 감소된 장 장벽 무결성은 장 내강에서 혈액 순환으로의 형광 마커 분자의 세포주위 수송을 촉진하며, 이는 장 투과성을 측정하기 위해 혈액의 혈청 분율에서 검출될 수 있습니다.

수술을 위해 마우스를 준비하고 맹장을 외부화합니다. 젖은 면봉을 사용하여 회장 전체를 외부에 바르고 젖은 면 거즈 위에 놓습니다. 중결장에 위치한 혈액 공급으로 근위 결장을 식별합니다. 근위 결장을 동원하고 맹장에서 약 0.5cm 떨어진 중결장에 혈관이 없는 영역에 첫 번째 결자를 만듭니다.

첫 번째 합자에서 2cm를 측정하고 중결장의 혈액 공급이 없는 부위에 두 번째 합자를 만듭니다. 가는 가위를 사용하여 각 결찰 옆을 조심스럽게 잘라 2cm 길이의 pcLoop를 분리합니다.

10밀리리터 주사기에 부착된 유연한 노란색 영양 튜브를 사용하여 대변을 제거하기 위해 따뜻한 HBSS로 pcLoop를 부드럽게 세척합니다. 수술 부위를 깨끗하게 유지하기 위해 복강 밖으로 내강 내용물을 씻어내십시오. 그런 다음 실크 봉합사를 사용하여 플러시된 pcLoop의 절단된 두 끝을 결찰합니다.

1게이지 바늘이 달린 30밀리리터 주사기를 사용하여 FITC-덱스트란 또는 케모카인과 같은 200마이크로리터의 시약을 장 내강에 천천히 주입합니다. pcLoop가 팽창하여 점막이 적당히 팽창합니다. 젖은 면봉을 사용하여 결찰된 pcLoop, 회장 및 맹장을 부드럽게 다시 넣습니다. 바늘 홀더, 해부학적 겸자, 역절단 바늘이 있는 3.0 비흡수성 실크 봉합사를 사용하여 복벽을 닫습니다.