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생물학
0 조회수 • 3:53 분 • July 8th, 2025
누운 자세에서 안락사된 마우스로 시작합니다. 뒷다리를 소독하십시오. 피부와 근막(피부 아래 결합 조직의 얇은 케이스)을 외과적으로 제거하여 밑에 있는 뒷다리 근육을 노출시킵니다.
경골 측면의 전경골근 또는 TA 근육을 찾습니다. TA 원위 힘줄을 잡고 밑에 있는 조직에서 근육을 분리합니다. 무릎 가까이의 근육을 절단하여 TA 근육을 절제하여 뒷다리의 전방 구획에 위치한 밑에 있는 장손가락 신근 또는 EDL 근육을 드러냅니다.
원위 EDL 힘줄을 절개하고 EDL 근육을 무릎 쪽으로 당깁니다. 근위 EDL 힘줄을 절단하여 EDL 근육을 절제합니다. 수확된 근육을 콜라게나제 효소가 포함된 예열된 배지가 있는 튜브로 옮기고 적절한 기간 동안 배양합니다. 콜라게나제는 근육 내의 각 근육 섬유 또는 근섬유를 둘러싼 결합 조직을 분해합니다. 이 소화 단계는 근육의 안쪽 층에서 근원섬유를 느슨하게 합니다.
배양 후, 소화된 근육을 미리 예열된 배지가 들어 있는 멀티웰 플레이트로 조심스럽게 옮겨 근원섬유의 생존율을 높입니다. 플레이트를 실체 현미경의 가열 단계로 옮깁니다. 이제 소화된 근육을 부드럽게 분쇄하여 개별 근섬유를 해리시키고 용액으로 방출합니다.
분리된 EDL 근섬유는 추가 다운스트림 분석에 사용할 수 있습니다.
모든 장비와 마우스의 뒷다리에 70% 에탄올을 뿌립니다. 딱딱한 가위와 가는 집게를 사용하여 피부를 제거하고 밑에 있는 근육을 노출시킵니다. 밑에 있는 근육을 손상시키지 않고 미세하게 구부러진 겸자로 주변 근막을 제거합니다.
전경골근 또는 TA를 제거하려면 집게로 원위 TA 힘줄을 잡고 가는 가위로 자릅니다. TA를 힘줄에 대고 무릎 쪽으로 당기고 무릎 가까이의 근육을 잘라 EDL 근육을 노출시킵니다.
곡선 겸자로 원위 EDL 힘줄을 들어 올리고 가는 Vannas 스프링 가위로 자릅니다. EDL을 무릎 쪽으로 조심스럽게 당겨 근위 EDL 힘줄을 노출시킵니다. 그런 다음 가위로 근위 힘줄을 자릅니다. 순환 수조에서 섭씨 37도의 반응 튜브에 있는 EDL 근육을 배양합니다. 근육이 느슨해지고 단일 근섬유가 보이면 소화를 멈춥니다.
가열판이 장착된 실체 쌍안 현미경에서 작업하면서 대구경 피펫을 사용하여 따뜻한 격리 매체로 근육을 세척합니다. 원하는 수의 근섬유가 용액에 자유롭게 떠 있을 때까지 대구경 피펫으로 근육을 해리시킵니다.