생물막의 생체 외 돼지 폐 모델: 돼지 기관지 조직의 박테리아 생물막을 연구하기 위한 폐 모델을 개발하는 기술

세기관지는 폐의 세뇨관 기도입니다. 만성 감염 중에는 점액 축적으로 인해 세기관지가 막힙니다. 영양이 풍부한 점액은 기회 박테리아가 자라기에 적합한 환경을 제공합니다. 이 박테리아는 자체 생산된 세포외 고분자 매트릭스에 내장되어 증식하여 생물막을 형성합니다.

폐의 박테리아 생물막 발달을 모방하려면 페트리 접시에서 돼지 세기관지 조직 표본을 채취하십시오. 조직을 원하는 모양의 조각으로 해부합니다. 페트리 접시에 생물막 배양 배지를 추가합니다. 자외선 아래에서 접시를 소독하여 표면 오염 물질을 제거하십시오.

멸균된 조직 조각을 박테리아 접착을 위한 최적의 기질 역할을 하는 생물막 배양 배지와 아가로스 패드가 포함된 멀티웰 플레이트로 옮깁니다. 다음으로, 원하는 박테리아의 콜로니가 들어 있는 바늘 끝을 각 조직 조각에 찔러 플랑크톤 박테리아를 조직에 도입합니다. 플레이트 표면 전체에 균일한 산소 교환을 용이하게 하는 UV 멸균 다공성 멤브레인으로 플레이트를 밀봉합니다. 밀봉된 플레이트를 배양합니다.

배양하는 동안 박테리아는 필리를 통해 상피 표면에 비가역적으로 부착하고 세포외 기질을 분비하기 시작합니다. 매트릭스 내에서 박테리아는 배양 배지의 에너지원, 뮤신 및 유리 DNA를 활용하여 생물막을 형성합니다. 박테리아 생물막 모델은 추가 테스트를 위한 준비가 되었습니다.

세기관지를 첫 번째 DMEM/RPMI 1640 세척에 넣습니다. 세척에 그대로 두고 동일한 폐에서 세기관지의 추가 절편을 채취하여 계획된 실험에 충분한 조직 절편을 산출합니다. 같은 폐의 추가 세기관지 절편을 세척제에 넣고 최소 2분 동안 세척제에 그대로 둡니다.

첫 번째 세척에서 세기관지를 제거하고 샘플을 멸균 페트리 접시에 넣습니다. 멸균 겸자로 각 세기관지를 가볍게 잡고 조직이 손상되지 않도록 주의하십시오. 남아 있는 연조직을 최대한 제거하고 멸균 해부 가위를 사용하여 조직을 5mm 너비의 스트립으로 자릅니다.

모든 세기관지 조직 스트립을 두 번째 DMEM/RPMI 1640 세척에 넣습니다. 최소 2분 동안 세탁물에 그대로 두십시오. 그런 다음 멸균 겸자를 사용하여 두 번째 세척에서 티슈 스트립을 제거하고 깨끗하고 멸균된 페트리 접시에 넣습니다. 세기관지에 부착된 남은 연조직을 제거하고 멸균 해부 가위를 사용하여 스트립을 정사각형으로 자릅니다.

세 번째 DMEM/RPMI 1640 세척제를 페트리 접시에 넣고 접시를 소용돌이치면서 세척제에 티슈 조각