돼지 심실 절편의 생성: 돼지 심장 조직의 초박형 절편을 준비하기 위한 비브라톰 기반 기술

생존 가능한 포유류 심실 심장 조직의 초박형 절편인 포유류 심장 조직 절편은 심장 조직의 구조와 생리학을 유지하여 중개 심혈관 연구를 위한 모델 시스템이 됩니다.

돼지 심장 조직 조각을 생성하려면 갓 수확한 돼지 심장을 냉장된 심정지 용액이 담긴 트레이에 넣으면 심장 활동이 일시적으로 중단되어 심장을 보호합니다. 심장을 해부하여 좌심실을 분리한 다음 균일한 크기의 조직 블록으로 절단합니다. 조직 접착제를 사용하여 심장 외막(심장의 바깥층)이 아래를 향하도록 진동 절개 표본 홀더의 바닥에 고정된 미리 만들어진 한천 블록에 조직 블록을 평평하게 고정합니다.

검체 홀더를 냉각되고 산소가 공급되고 완충액으로 채워진 진동 절개 트레이로 옮겨 조직의 생리적 상태를 유지하고 슬라이싱하는 동안 냉각합니다. 원하는 조직 절편 두께에 따라 진동극 블레이드 높이와 절단 매개변수를 조정합니다. 달리는 동안 진동 블레이드가 전진하여 조직 블록을 관통합니다.

한천은 슬라이싱하는 동안 조직 블록에 안정성을 제공하고 블레이드를 한 경로로 유지하여 정렬된 심근 섬유가 있는 균일하고 온전한 심장 조직 조각을 생성합니다. 조직 손상을 줄이기 위해 조직 절편을 수집하여 산소 완충 수조로 옮깁니다. 심장 조직 절편은 다운스트림 분석을 위한 준비가 되었습니다.

돼지 심장 조직 조각을 얻으려면 먼저 비브라톰의 조직 욕조 냉각 재킷에 얼음을 넣고 Tyrode의 용액을 욕조에 추가합니다. 1리터 플라스틱 병을 사용하여 티슈 욕조 냉각 재킷에서 녹은 얼음 유출을 수집하고 돼지 심장을 생물 안전 캐비닛에 있는 신선하고 차가운 심정지 용액 1리터가 들어 있는 트레이로 옮깁니다.

개폐식 멸균 메스를 사용하여 심장을 해부하여 좌심실을 분리하고 직사각형 면도날을 사용하여 좌심실을 1-2 입방체 센티미터 블록으로 자릅니다. 슬라이스를 위해 하나의 티슈 블록을 따로 보관하고 나머지 티슈 블록 조각을 얼음 위의 차가운 티로드 용액이 담긴 50밀리리터 튜브에 넣습니다.

예약된 티슈 블록을 부드럽게 마사지하고 비브라토임의 금속 샘플 홀더에 티슈 접착제 1-2방울을 추가합니다. 표면적이 약 1제곱센티미터인 4% 한천 블록 조각을 접착제에 붙이고 한천에 조직 접착제 1-2방울을 추가합니다.

심장 블록을 심장 심외막 쪽이 아래로 향하게 하고 조직이 홀더에 최대한 평평하게 되도록 한천에 부착하고 심장 블록이 있는 조직 홀더를 진동술의 슬라이싱 욕조에 넣습니다.

장 심외막 쪽이 조직 접착제 위에 아래를 향하도록 하트 블록을 한천에 붙이고 조직이 가능한 한 평평한지 확인하는 것이 중요합니다.

그런 다음 산소 튜브를 슬라이싱 욕조와 Tyrode 용액으로 채워진 금속 트레이에 부착하고 금속 트레이에 40마이크로미터 세포 스트레이너를 놓아 슬라이스되는 심장 조직 절편을 수집합니다. 진동 절개술 작동 소프트웨어를 사용하여 블레이드와 샘플의 높이를 조정하여 블레이드가 조직의 상단에 가깝지만 유두 근육 아래에 있고 액체가 조직과 블레이드를 덮

Advance(진행)를 선택하여 티슈 슬라이스를 시작할 위치를 조정합니다. 슬라이스를 눌러 속도를 높이고 손잡이를 사용하여 블레이드를 티슈 가장자리 쪽으로 움직입니다. 슬라이스를 다시 눌러 중지하고 진행을 눌러 프로세스를 비활성화합니다. 그런 다음 표시된 대로 절단 매개변수를 조정하고 슬라이스를 눌러 조직 슬라이스를 시작합니다. 블레이드가 조직의 끝에 도달하지만 시편 홀더의 끝에 닿기 전에 슬라이스를 다시 눌러 중지하고 Return을 눌러 시작 위치로 돌아갑니다.

슬라이스가 전체 길이에 도달하고 품질이 양호한 것으로 보이면 차가운 Tyrode 용액으로 채워진 플라스틱 파스퇴르 피펫을 사용하여 필요에 따라 집게와 스프링 가위를 사용하여 심장에서 슬라이스를 탈구시키면서 욕조에서 조직을 부드럽게 수집합니다. 수집된 각 슬라이스를 산소가 공급된 Tyrode 수조의 단일 세포 여과기에 넣고 피펫의 용액을 사용하여 세포 여과기 표면의 조직을 누릅니다.