0 조회수 • 3:29 분 • July 8th, 2025
배양 접시에 불소화 에틸렌 프로필렌 또는 FEP 분말 베드를 준비합니다. 난구-난모세포 복합체 또는 COC를 포함하는 성숙 배지 한 방울을 FEP 분말에 추가합니다. 분말 위로 방울을 부드럽게 굴려 액체 구슬 또는 LM을 만듭니다. FEP 분말은 소수성 다공성 껍질을 생성하여 내부 액체와 주변 환경 사이의 가스 교환을 가능하게 합니다.
이제 LM 장치를 수집하여 IVF 페트리 접시의 중앙 우물로 옮깁니다. COC의 수분을 유지하기 위해 외부 링에 멸균수를 추가합니다. 그런 다음 난모세포 성숙을 허용하기 위해 생리학적 조건에서 LM을 배양합니다.
다음으로, 사용한 배지를 제거하고 신선한 숙성 배지를 추가합니다. 직접적인 액체 접촉은 소수성 FEP 쉘을 파괴하고 LM을 파괴하여 COC를 방출합니다. 방출된 COC를 새로운 성숙 배지 한 방울이 들어 있는 새 접시로 옮기고 세척하여 FEP 입자를 제거합니다.
세척 후 COC와 신선한 배지를 FEP 분말 베드로 옮깁니다. 방울을 굴려 가루로 코팅합니다. 마지막으로 LM을 IVF 페트리 접시로 옮깁니다. FEP 분말 코팅 LM은 난모세포의 3D 구조를 유지하고 생존력을 향상시킵니다.
30mm 페트리 접시에 FEP 분말 5g을 담아 침대를 만듭니다. 3-5개의 COC를 포함하는 성숙 배지의 단일 방울을 FEP 분말에 분배합니다. 플레이트를 원을 그리며 부드럽게 회전시켜 입자가 액체 방울의 표면을 완전히 덮고 액체 구슬 또는 LM을 형성
하도록 합니다.60mm IVF 페트리 접시 여러 개를 준비하고 외부 링에 3-4ml의 멸균수를 추가하여 습도 챔버를 만듭니다. 1,000마이크로리터 피펫으로 형성된 LM을 집어 중앙 웰에 넣습니다. 5% 이산화탄소 인큐베이터에서 섭씨 38도에서 4일 동안 구슬을 배양합니다.
배지를 교체하려면 각 LM에 30마이크로리터의 성숙 배지를 도포하면 LM이 퍼집니다. 대리석 내용물이 용해되면 바이오리액터에서 방출된 COC를 페트리 접시의 신선한 성숙 배지 한 방울로 옮깁니다. 성숙 배지에서 3-4회 세척한 후, 30마이크로리터의 신선한 배지와 함께 COC를 FEP 분말 베드로 옮깁니다.
플레이트를 원을 그리며 부드럽게 회전시켜 분말 입자가 액체 방울 표면을 완전히 덮고 새로운 LM을 형성하도록 합니다. 그런 다음 LM을 IVF 페트리 접시로 옮깁니다.