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생물학
0 조회수 • 4:11 분 • July 8th, 2025
돼지 각막의 가장 안쪽 층인 투명한 무혈성 앞눈 부분은 각막 내피 세포(CEC)로 구성되며 기저막인 데스메막(DM)에 의해 지지됩니다. CEC는 각막 투명성과 최적의 시력을 유지합니다. 손상이 발생하면 시력에 영향을 미칠 수 있습니다.
선택적 CEC 손상의 경우 적절한 배지에서 갓 수확한 돼지 눈으로 시작하십시오. 주변 조직을 제거합니다. 표면 미생물 오염을 제거하기 위해 적절한 소독제로 눈을 치료하십시오. 식염수 세척 후 레이저 조사 전에 전방 눈을 광학적으로 검사하여 이상을 배제합니다.
특정 파장의 레이저가 장착된 세극등 장치 앞에 있는 맞춤형 고정 장치에 눈을 고정합니다. 개별 각막층을 시각화합니다. 적절한 레이저 에너지와 초점 위치를 사용하여 레이저 펄스를 각막 내피층으로 향하게 합니다. 집중된 단시간 고출력 펄스는 열 확산을 방지하면서 노출된 표면에서 선택적 CEC 파열을 일으켜 DM 또는 간질 조직을 보호합니다.
각막 공막 접합부인 윤부 근처에 진입 포트를 만들고 각막을 포함하는 전방에 점탄성 용액을 주입하여 각막을 안정화하고 나머지 CEC를 보호합니다. 레이저로 처리된 각막 부분을 절제하여 CEC 면이 위를 향하도록 배지가 포함된 멀티웰 플레이트로 옮깁니다. 생체 외 각막 내피 손상 모델은 추가 연구에 사용될 수 있습니다.
현지 도축장에서 새로 적출된 돼지 눈을 얻은 후 샘플을 섭씨 4도, 전체 배지에 놓습니다. 가위를 사용하여 세포외 조직을 제거하고 5% 포비돈-요오드 점안액에 눈을 5분 동안 담그십시오. 다음으로, 소독된 샘플을 실온의 멸균 PBS에 넣습니다.
스펙트럼 영역 광간섭 단층 촬영 장치를 사용하여 각막 흉터, 부종 및 기타 혼탁과 같은 주요 전안부 병리가 있는지 눈을 선별합니다. 스크리닝 후, 파장 1064나노미터, 초점 직경 10마이크로미터의 Nd:YAG 레이저가 장착된 세극등 장치 앞에 눈을 배치합니다. 12X 배율을 선택하고 조명을 편향시켜 개별 각막층을 시각화합니다.
펄스 에너지와 초점 포인트를 각막 내피 세포의 선택적 절제를 위한 적절한 매개변수로 설정한 후 조직에 여러 번의 레이저 샷을 적용합니다. 그런 다음 해부 현미경으로 윤부 가까이에 투명한 각막 천자를 배치하고 점탄성을 주입하여 내부 챔버를 안정화합니다. 그런 다음 8mm 트레핀을 사용하여 레이저로 치료된 중앙 각막을 절제하고 분리된 각막을 내피면이 위로 향하도록 12웰 플레이트의 한 웰에 넣습니다. 각막을 모두 수집하면 각 샘플 웰에 3밀리리터의 전체 배지를 추가하고 검체를 섭씨 37도에서 최대 3일 동안 배양합니다.