토끼 배아 해동: 배아 이식을 위해 냉동 보존된 토끼 배아를 회수하기 위한 온난화 절차

배아 해동은 냉동 보존된 냉동 배아를 데우고 재수화하여 생물학적 활동을 회복하는 과정입니다.

밀봉된 극저온 빨대에서 냉동 보존된 토끼 배아를 해동하려면 액체 질소에서 빨대를 제거하십시오. 최소한의 양의 냉동 보호제 함유 배지를 가진 배아는 빨대 내의 공기 및 배지 세그먼트에 의해 물리적으로 격리됩니다. 빨대를 공기 중에 잠깐 배치하여 갇힌 액체 질소 증기의 방출을 촉진하며, 그렇지 않으면 따뜻한 온도에 노출되는 동안 배아 손상을 일으킵니다.

극저온 액체질소 온도에서 더 높은 동결 온도로 급격히 상승하면 극저온 빨대 내에서 얼음 결정이 형성되어 배아 손상 위험이 있습니다. 얼음 결정이 형성되기 시작하면 즉시 빨대를 온도 조절이 가능한 수조에 담그고 부드럽게 저어주어 균일하게 해동합니다. 이 단계는 얼음 결정을 제거하여 얼음 결정 손상으로부터 배아를 보호합니다.

빨대 플러그를 제거합니다. 빨대의 밀봉된 끝을 자릅니다. 마이크로디스펜서를 부착하여 내용물을 자당 함유 배지가 있는 배양 플레이트에 방출합니다. 배지는 배아에서 냉동 보호제를 제거하는 데 도움이 됩니다. 자당은 배아의 과도한 부종을 방지하여 수분 보충 중에 생리적 환경을 회복시킵니다.

배아를 신선한 배지 함유 플레이트로 옮겨 냉동 보호제를 완전히 제거하여 완전한 재수화를 보장합니다. 해동된 배아는 배아 이식 절차를 위한 준비가 되었습니다.

이식을 위해 배아를 해동하려면 액체 질소 증기에서 10cm 떨어진 곳에 미니 빨대를 20-30초 동안 수평으로 놓습니다. 미니 빨대 내부에서 결정화 과정이 시작되면 빨대를 섭씨 25도의 수조에 10-15초 동안 담급니다. 빨대와 면봉 플러그를 즉시 제거하고 결합된 마이크로디스펜서를 사용하여 배아가 5분 동안 남아 있어야 하는 섭씨 25도 자당 용액이 보충된 섭씨 0.33도 기본 배지가 들어 있는 접시에 미니빨대 내용물을 배출합니다. 그런 다음 배아를 신선한 기본 배지 플레이트에 옮겨 5분 동안 배양합니다.