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생물학적 기술
0 조회수 • 3:48 분 • July 8th, 2025
유체역학적 유전자 전달을 수행하려면 관심 유전자를 운반하는 재조합 플라스미드가 포함된 식염수 기반 용액으로 채워진 주사기를 가져가는 것부터 시작하십시오. 그 후, 마우스 모델을 취하여 꼬리 기저부에 다량의 플라스미드 용액을 빠르게 주입하여 플라스미드 용액이 꼬리 정맥에 정맥 주사되도록 합니다.
다량의 플라스미드를 가압 주입하면 유체역학적 힘이라는 기계적 힘이 생성되어 산소가 제거된 혈액을 심장으로 운반하는 정맥인 하대정맥의 혈관 내압이 증가합니다.
많은 양의 액체는 심장의 우심실에 울혈을 유발하여 혈액 방향으로 역전시킵니다. 이 단계는 플라스미드 용액이 간정맥으로 들어가 간으로 운반되도록 합니다.
플라스미드는 내피 세포가 늘어선 간 공간인 간 정현파 내부로 이동합니다. 혈액량이 증가하면 플라스미드가 내피층을 투과화하여 주변 간세포인 간 세포 근처에 도달하는 데 도움이 됩니다.
플라스미드 용액의 빠른 유입은 간세포 세포막에 압력을 가하여 일시적인 기공을 생성합니다. 이 기공은 세포의 플라스미드 DNA 흡수를 촉진합니다. 나중에 막 기공이 닫혀 간세포 내에 플라스미드를 가둡니다.
간세포에서 관심 유전자의 성공적인 발현은 형질감염을 확인합니다.
마우스의 무게를 측정하는 것으로 시작한 다음, 식염수 내독소가 없는 잠자는 숲속의 미녀 벡터 구조물의 밀리리터당 15마이크로그램과 밀리리터당 1마이크로그램의 내독소가 없는 pc-HSB5를 포함하는 멸균 식염수를 준비합니다. 각 마우스에게 체중의 10%에 해당하는 부피를 주입할 수 있을 만큼 충분한 용액을 준비합니다. 멸균 3밀리리터 주사기에 마우스 한 마리에 필요한 양을 채우고 27게이지 바늘을 부착합니다.
움직임을 위한 공간을 최소화하고 호흡을 위한 충분한 공간을 남겨두기 위해 적당량의 티슈 페이퍼를 추가한 후 호흡 구멍이 있는 적절한 구속기에 마우스를 삽입합니다. 적외선 램프를 사용하여 꼬리를 30-60초 동안 데우고 꼬리의 빠른 움직임이나 기타 동요 징후와 같은 과열 징후를 주의 깊게 관찰한 다음 알코올 면봉으로 꼬리를 청소합니다.
꼬리 기저부에 가까운 두 개의 측면 꼬리 정맥 중 하나에 바늘을 거의 수평으로 삽입합니다. 성공적으로 배치되면 소량의 혈액이 바늘의 원뿔로 다시 흐를 수 있습니다. 8-10초 이내에 총 부피를 꼬리 정맥에 주입합니다. 주사 후 즉시 구속기에서 마우스를 제거하십시오. 멸균 거즈로 최소 30초 동안 또는 출혈이 가라앉을 때까지 주사 상처를 압박합니다.
성공적인 유체역학적 꼬리 정맥 주입은 형질감염에 매우 중요하며, 특히 주입 속도, 부피 및 시간에 따라 달라집니다. 정맥 주사를 더 쉽게 하려면 주사 당일 마우스가 스트레스를 받거나 탈수되지 않았는지 확인하십시오.
회복 케이지에서 30-60분 동안 단독으로 하우징한 후 마우스를 원래 케이지로 다시 옮깁니다.