Biolistic-Mediated Gene Transfer: Biolistic Gene Gun을 통해 표적 세포에 관심 유전자를 전달하는 기술

미세 원심분리기 튜브에서 최적의 양의 금 구슬(생물학적으로 불활성이고 무독성 유전자 전달 비히클)으로 시작합니다. 그런 다음 양이온제인 스페르미딘과 염화칼슘을 첨가한 다음 원하는 DNA 단편을 금 구슬에 첨가합니다. 튜브를 부드럽게 튕기고 배양합니다.

염화칼슘은 DNA 단편에 결합하고 스페르미딘 잔기를 통해 금 구슬 위의 코팅을 용이하게 합니다. 다음으로 원심분리하여 용매를 제거합니다. DNA로 코팅된 비드를 에탄올에 재현탁합니다. 멸균 매크로 캐리어 디스크에 비드를 부드럽게 피펫팅합니다. 말리십시오.

헬륨 가스 가속 튜브와 파열판과 각각의 슬롯에 정지 스크린이 있는 폭격실로 구성된 생물학적 유전자 총 장치를 설치합니다. 그런 다음 매크로캐리어 디스크를 뒤집어 파열판 아래에 로드합니다.

그 후, 형질전환 효율을 향상시키기 위해 삼투압 안정제인 소르비톨이 보충된 적절한 고체 배지에 배양된 표적 숙주 세포를 배치합니다. 설정이 준비되면 유전자 총을 발사합니다.

헬륨이 가속관을 따라 이동함에 따라 파열판이 파손될 때까지 압력이 계속 증가하여 헬륨 충격파가 생성됩니다. 이러한 충격파는 금 구슬을 운반하는 매크로 캐리어 디스크를 정지 화면 쪽으로 구동하여 금 구슬만 통과할 수 있도록 합니다.

가속된 금 구슬은 숙주 세포 핵을 관통하여 원하는 DNA를 숙주 세포 게놈에 통합합니다.

집게를 사용하여 주황색 매크로 캐리어 바이오리스틱 디스크를 100% 에탄올에 담근 다음 디스크가 건조제에 닿지 않도록 주의하면서 드라이어라이트가 들어 있는 큰 페트리 접시에 디스크를 옮깁니다. 건조되면 디스크를 에탄올로 닦은 은 디스크 홀더에 누른 다음 금 구슬 튜브를 소용돌이치고 변형당 12마이크로리터의 구슬 용액을 1.5밀리리터 미세 원심분리기 튜브에 분취합니다.

다음으로, DNA 2마이크로그램, 염화칼슘 10마이크로리터, 스페르미딘 유리 염기 2마이크로리터를 각 비드 튜브에 순차적으로 첨가합니다. 그런 다음 각 샘플을 소용돌이치고, 튜브를 주변 온도에서 5분 동안 배양하고, 가끔 부드럽게 흔들어 침전된 비드를 재현탁시킵니다.

배양이 끝나면 DNA로 코팅된 금 구슬을 펠릿화하고 상청액을 조심스럽게 흡인합니다. 비드를 600마이크로리터의 100% 에탄올에 완전히 완전히 재현탁한 다음 세포를 다시 펠릿화하여 이번에는 비드를 8마이크로리터의 에탄올에 재현탁시킵니다.

이제 각 구슬 튜브를 직경 1센티미터의 원으로 개별 생체 디스크의 중앙에 분배합니