0 조회수 • 3:02 분 • July 8th, 2025
레트로바이러스 벡터를 함유한 RNA로 숙주 세포를 형질도입하려면 적절한 배지에 포장된 벡터가 들어 있는 튜브를 가져갑니다. 각 벡터에는 숙주 게놈과 중요한 바이러스 효소에 통합될 이식유전자의 RNA 보체를 포함하는 바이러스 캡시드가 포함되어 있습니다. 지질 이중층이 캡시드를 둘러싸고 숙주 세포로의 진입을 용이하게 합니다.
적절한 형질감염 시약이 있는 상태에서 숙주 세포 현탁액을 포함하는 배양 플레이트의 웰에 벡터를 첨가합니다. 접시를 덮습니다. 스핀 변환을 허용하기 위해 저속으로 원심분리합니다. 이것은 바이러스 벡터를 숙주 세포 표면에 더 가깝게 만들어 형질도입 효율을 증가시킵니다.
동시에, 형질감염 시약의 폴리케이션은 바이러스와 숙주 세포의 음전하를 중화하여 표적 세포로의 바이러스 흡착을 촉진합니다.
결과적으로 바이러스 표면의 수용체는 숙주막과의 융합을 촉진합니다. 바이러스 캡시드는 세포에 들어가 파열되어 형질전환 RNA와 바이러스 효소를 세포질로 방출합니다.
세포질 내부에서 바이러스 역전사 효소는 RNA를 단일 가닥 상보적 DNA로 전환한 후 나중에 이중 가닥 프로바이러스 DNA로 변경합니다. 생성된 DNA는 핵으로 들어갑니다. 바이러스 인테그라제 효소는 프로바이러스 DNA를 숙주 게놈으로 통합하여 형질도입된 세포를 생성합니다.
바이러스 생산자 세포주에서 신선한 바이러스 상청액을 수집합니다. 이 시점에서 세포는 정의된 형태로 충분한 간격을 두어야 합니다. 다음으로, 골수 세포를 포함하는 6웰 플레이트의 각 웰에서 상단 2밀리리터의 배지를 조심스럽게 흡인합니다. 일반적으로 우물 중앙에 집중되어 있는 골수 세포를 흡인하지 마십시오.
골수 세포를 포함하는 6웰 플레이트의 각 웰에 새로 보충된 바이러스 상청액 3밀리리터를 추가합니다. 플레이트를 플라스틱으로 감싼 후 스핀 형질도입을 반복한 다음 포장되지 않은 플레이트를 조직 배양 인큐베이터에 넣습니다. 셋째 날 24시간 후, 웰에서 2밀리리터의 배지를 제거하고 교체합니다.