0 조회수 • 2:44 분 • July 8th, 2025
간 지방증은 두드러진 간 세포 유형인 간세포에 지방이 과도하게 축적되는 것을 특징으로 하는 병리학적 상태입니다. 지방은 간세포의 세포질에 다양한 크기의 지질 방울 형태로 침착됩니다.
구조적으로 지질 방울에는 트리글리세리드 및 콜레스테롤 에스테르와 같은 중성 소수성 지방의 핵심이 포함되어 있습니다. 코어는 다양한 단백질로 장식된 인지질 단층으로 둘러싸여 있습니다.
지방 침착을 시각화하려면 부착 간세포 배양물이 포함된 멀티웰 플레이트를 가져 가십시오. 세포는 지방성 배지로 전처리되어 내부에 지질 방울 축적을 유도합니다.
원하는 농도의 파라포름알데히드를 첨가하여 세포로 확산되고 단백질을 가교합니다. 이 단계는 프로테아제를 비활성화하고 간세포 구조를 보존합니다. 파라포름알데히드를 버리고 이소프로판올에 용해된 유기 염료를 함유한 Oil-red-O 용액을 첨가합니다.
이소프로판올은 용해성이 낮은 Oil-red-O 분자의 운반 용매 역할을 합니다. 이것은 염료 분자가 고정된 간세포에 들어가 결국 지질 방울에 도달하는 데 도움이 됩니다. 일단 내부로 들어가면 염료는 더 높은 친화력으로 인해 이소프로판올에서 중성 지질로 전달되어 염료-지질 복합체를 형성합니다. 이로 인해 지질 방울이 붉게 착색됩니다.
여분의 염료를 버리고 현미경으로 세포를 관찰하십시오. 세포내 지질 방울은 강렬하게 붉게 보입니다.
24웰 플레이트의 모든 웰에 세포 배양 커버슬립을 넣고 텍스트 원고에 설명된 대로 HepG2 세포를 시드합니다. 적절한 배양 후, PBS 1밀리리터로 세포를 세척하고 상청액을 버립니다. PBS에 4% 파라포름알데히드 1밀리리터를 고정하고 실온에서 1시간 동안 배양합니다. 여분의 파라포름알데히드를 버리고 증류수 1밀리리터로 세포를 헹굽니다.
그런 다음 70% 이소프로판올 1밀리리터를 넣고 5분 동안 배양합니다. 여분의 이소프로판올을 버리고 오일-레드 O 용액 1밀리리터를 넣고 30분 동안 배양합니다. 여분의 오일-레드 O 용액을 버린 다음 증류수 1ml로 헹굽니다. 현미경으로 세포를 400배의 배율로 관찰합니다.