0 조회수 • 3:32 분 • July 8th, 2025
조류는 다양한 지질을 생산하는 수생 광합성 유기체이며, 그 중 중성 지질은 바이오디젤 생산에 필수적입니다.
중성 지질을 검출하고 정량화하려면 검은색 마이크로타이터 플레이트 웰에 최적의 양의 조류 현탁액과 에탄올을 혼합합니다. 대부분의 얼룩이 침투하는 것을 방지하는 조류 세포벽과 막은 에탄올에 노출되면 투과성이 됩니다. 다음으로, 에탄올을 지용성 형광 염료인 나일 레드와 결합합니다. 이 혼합물을 조류 함유 우물에 첨가하십시오.
마이크로타이터 플레이트를 분광 광도계에 놓습니다. 염료와 조류 사이의 상호 작용을 촉진하기 위해 간헐적인 흔들림으로 배양을 보장하는 프로그램을 설정합니다.
나일 레드는 소수성이기 때문에 세포질을 쉽게 통과할 수 없습니다. 에탄올과 같은 용매는 나일 레드와 결합하면 염료를 동원하여 세포질에 분산된 지질체에 도달하도록 돕습니다. 그런 다음 나일 레드가 지질체에 침투하여 그곳에 가용화되어 지질을 염색합니다.
지질 결핍 세포는 어두운 몸체를 가진 형광 고리로 나타나는 반면, 지질이 풍부한 세포는 지질체가 축적된 곳에서 밝은 주황색-빨간색 빛을 보입니다.
세포를 염색한 후 중성 지질을 최대한 여기시키는 파장에 노출시킵니다. 결과 형광을 기록하고 이를 검량선과 연관시켜 테스트 샘플의 중성 지질을 정량화합니다.
형광 정량화의 경우 측정에 사용된 표준과 동일한 방식으로 동일한 바이오매스 농도로 모든 조류 샘플을 준비합니다. 이를 위해 사전 건조된 샘플을 적절한 양의 인산염 완충액에 현탁시켜 사용합니다. 필요한 경우 균질화기를 사용하여 건조된 조류 세포의 재현탁을 용이하게 합니다.
각 샘플에 대해 96웰 플레이트의 단일 웰에 80마이크로리터의 준비된 30% 에탄올 용액, 10마이크로리터의 준비된 나일 레드 용액 및 10마이크로리터의 조류 현탁액을 혼합합니다. 형광 측정의 가변성을 적절하게 설명하려면 각 샘플을 5회 반복합니다. 다음으로, 기기 및 준비의 일상적인 변화를 설명하기 위해 이전에 준비된 표준물질로 2점 검량선을 실행합니다.
멀티웰 플레이트 리더 분광 광도계에서 형광 측정을 수행하려면 매개변수를 1,200rpm에서 흔들고 3mm 3초 동안 궤도를 돌도록 설정한 다음 섭씨 40도에서 10분 동안 배양합니다. 1,200rpm에서 또 다른 흔들기, 30초 동안 3mm 궤도를 돌고, 530나노미터에서 여기, 604나노미터에서 방출하여 형광을 기록합니다. 그런 다음 실행을 시작합니다. 마지막 단계로, 내부 표준의 결과를 사용하여 형광 측정값을 오일 함량으로 변환합니다.