0 조회수 • 3:14 분 • July 8th, 2025
연조직 미세 환경에서 세포 세포질 특이적 염색을 위해 갓 수확한 마우스 신장을 얻습니다. 포름알데히드, 빙초산, 메탄올을 함유한 고정액으로 처리하십시오. 저온에서 배양하십시오.
포름알데히드는 세포에 침투하여 단백질을 단백질로, 단백질을 핵산에 가교합니다. 메탄올은 조직에서 물을 대체하고 단백질을 응고시킵니다. 아세트산은 세포내 산성화와 조직 부종을 일으켜 메탄올로 인한 조직 수축을 상쇄합니다.
고정은 효소를 비활성화하고 후속 염색을 위해 조직 형태를 안정화합니다. 완충액을 사용하여 과도한 고정액을 제거합니다. 산성 염료인 에오신 Y와 함께 조직을 배양합니다.
에오신은 고정된 세포에 침투하여 세포질로 들어갑니다. 아세트산 처리로 인한 세포질의 산성 환경은 세포질 단백질의 아미노 그룹의 최대 양성자화를 유발합니다.
음전하를 띤 작용기를 가진 에오신은 양성자화된 단백질 그룹과 정전기적으로 상호 작용하여 안정적인 염료-단백질 복합체를 형성하고 축적 시 세포질을 분홍색으로 염색합니다. 배양 후, 염색된 신장을 작은 조각으로 자른 다음 에탄올 농도를 증가시키면서 조직 탈수를 합니다.
신장 조직을 파라핀 왁스에 삽입합니다. 마이크로톰을 사용하여 얇은 조직 절편을 얻습니다. 또한 현미경 분석을 위해 절편을 재수화합니다.
염색되지 않은 세포핵은 분홍색으로 염색된 세포질에 대해 흰색으로 나타나 브러시 테두리가 있는 상피 세포로 구성된 근위 나선형 세뇨관 또는 브러시 테두리가 없는 편평한 상피 세포로 늘어선 집합관과 같은 신장 미세 구조를 시각화할 수 있습니다.
연조직 샘플을 고정하는 것부터 시작하십시오. 50밀리리터 원심분리기 튜브에 9.5밀리리터의 4% 포름알데히드와 0.5밀리리터의 빙초산이 들어 있는 고정액을 채웁니다. 연조직 샘플을 원심분리기 튜브에 넣고 24-72시간 동안 냉장 보관합니다.
냉장 보관 후 연조직 샘플을 DPBS 용액으로 1시간 동안 세척합니다. 그런 다음 샘플을 2밀리리터의 에오신 Y-염색 용액에 넣어 염색하고 수평 진탕판에서 24시간 동안 배양합니다.
다음날 샘플 용기에서 연조직 샘플을 조심스럽게 꺼내 셀룰로오스 티슈 페이퍼로 과도한 염색제를 제거합니다. 보관 및 추가 사용을 위해 에탄올 증기상 위의 원추형 용기에 넣으십시오.