세포의 주기적 산-쉬프 염색: 말초 혈액 단핵 세포에서 글리코겐 수치를 감지하는 시험관 기술

말초 혈액 단핵 세포(PBMC)는 B 및 T 림프구, 자연 살해 세포, 단핵구 및 수지상 세포로 구성된 단일 큰 핵을 가진 순환 혈액 세포입니다. PBMC는 잉여 포도당을 분지된 다당류인 글리코겐으로 고분자 형태로 세포질에 저장합니다.

PBMC에서 글리코겐 존재를 검출하려면 유리 슬라이드에 분리된 PBMC의 균일한 도말을 준비합니다. 세포 생체 분자를 가교하여 PBMC의 구조적 무결성을 보존하는 고정 용액인 포르말린으로 세포를 처리합니다.

슬라이드를 아밀라아제 용액에 부분적으로 담그십시오. 이 효소는 세포에 들어가 처리된 세포에서 글리코겐을 가수분해합니다. 그 결과 효소 처리, 글리코겐 결핍 및 비아밀라아제 처리, 글리코겐이 풍부한 두 가지 세포 집단이 생성됩니다.

글리코겐 분자의 수산기를 알데히드로 산화적으로 전환시키는 요오드산 용액으로 오버레이하십시오.

슬라이드를 물로 헹구어 산화 반응을 멈추고 과도한 요오드산을 제거합니다. 요오드산으로 처리된 글리코겐의 알데히드 그룹과 반응하여 불용성 자홍색 복합체를 생성하는 Schiff 시약으로 슬라이드를 처리합니다.

이미징 중에 세포를 억제하기 위해 마운팅 매체를 적용합니다. 커버슬립을 놓아 슬라이드 표면 전체에 장착 매체를 퍼뜨려 더 나은 시각화를 제공합니다. 염색된 세포를 이미지화합니다.

아밀라아제로 처리되지 않은 세포에는 효소 처리된 세포에는 없는 마젠타 글리코겐 과립이 포함되어 있습니다.

이 단계에서는 슬라이드를 평평한 표면에 놓습니다. 샘플에 요오드산 용액 2밀리리터를 바르고 실온에서 5분 동안 배양합니다. 그런 다음 증류수로 슬라이드를 여러 번 헹굽니다. 슬라이드에 2밀리리터의 Schiff 시약을 바르고 실온에서 15분 동안 배양합니다.

그런 다음 슬라이드를 증류수로 5분 동안 세척한 다음 자연 건조시킵니다. 그런 다음 슬라이드에 100마이크로리터 장착 매체를 바르고 하나의 큰 커버슬립으로 덮거나 50마이크로리터를 바르고 두 개의 작은 커버슬립을 사용합니다. 그런 다음 커버슬립 가장자리에 투명 매니큐어를 바르십시오. 밤새 말리십시오.

그런 다음 100X 대물렌즈를 사용하여 쌍안경 현미경으로 이미지를 얻습니다.