0 조회수 • 3:32 분 • July 8th, 2025
이질적인 종양 세포 집단에서 항암제로 치료하면 대부분의 세포가 죽지만 약물 내성 세포는 생존하여 치료 실패를 초래합니다.
약물 내성 세포의 비율을 결정하려면 다중 웰 플레이트에 이질적인 종양 세포 집단을 시드합니다. 세포 부착을 촉진하기 위해 배양합니다. 적절한 항암제 용액의 농도를 증가시킵니다.
약물 분자와의 상호 작용으로 인해 민감한 세포가 죽고 이후 배양 플레이트에서 분리됩니다. 대조적으로, 약물 내성 세포는 생존하여 플레이트에 부착된 상태로 유지됩니다.
사용한 배지를 흡인하여 분리된 세포를 제거합니다. 신선한 약물이 없는 배지를 추가하고 생리학적 조건에서 플레이트를 배양합니다. 약물 내성 세포는 증식하여 종양 콜로니를 형성합니다. 이제 크리스탈 바이올렛 염색 용액을 콜로니에 첨가하고 배양합니다.
보라색, 막 투과성, 양전하를 띤 염색인 크리스탈 바이올렛은 세포에 들어가 음이온 단백질과 DNA에 결합하여 세포에 보라색을 부여합니다.
다음으로 에탄올을 첨가하여 반응하지 않은 염색을 가용화합니다. 과도한 얼룩을 제거하기 위해 세척하고 접시를 자연 건조시킵니다.
약물 내성 콜로니는 보라색 점으로 나타납니다. 각 우물에 있는 유색 식민지의 수를 세십시오. 각 약물 농도에서 약물 내성 암세포의 비율을 결정하기 위해 그래프에서 세포 생존율의 백분율을 나타냅니다.
이 절차에서는 6웰 플레이트에 웰당 2밀리리터의 배지를 사용하여 2000개의 세포를 플레이트합니다. 24시간 후, DU145 및 22Rv1 세포주 모두에 대해 증가하는 농도의 도세탁셀을 첨가합니다. DMSO를 최고 도세탁셀 용량에 사용되는 것과 동일한 부피의 대조군으로 하나의 웰에만 추가합니다.
72시간 후, 약물 함유 배지를 흡인하고 새로운 도세탁셀이 없는 배지를 추가합니다. 현미경으로 콜로니가 보일 때까지 플레이트를 1-2주 동안 배양합니다.
콜로니를 염색하려면 2-3밀리리터의 PBS로 부드럽게 세척하고 조직 배양 후드 또는 흄 후드 내부에서 2-3밀리리터의 크리스탈 바이올렛 용액과 함께 20분 동안 배양합니다. 그런 다음 염색액을 제거하고 2-3밀리리터의 물로 플레이트를 씻습니다. 그런 다음 물을 제거하고 접시를 자연 건조시킵니다.
그림 표현을 위해 플레이트의 디지털 이미지를 촬영합니다. 우물을 시각화하고 마커 펜을 사용하여 식민지를 수동으로 계산하여 결과를 분석합니다.