JoVE 실험 백과사전
생물학적 기술
0 조회수 • 3:37 분 • July 8th, 2025
초파리 유충 옥아매세포는 피부의 표면인 측면 표피의 기저면에 개별 클러스터 형태로 부착되는 특수 세포입니다. 이 오에노 세포는 주로 지질 대사에 관여합니다.
기아 동안 이 오네오 세포는 과도한 지질 방울을 축적합니다. 각 물방울은 인지질 단층으로 둘러싸인 중성지방 및 콜레스테롤 에스테르와 같은 중성 지질의 소수성 코어로 구성됩니다.
지질 방울을 시각화하려면 산세포가 부착된 초파리 유충 표피의 해부된 절편을 채취하십시오. 파라포름알데히드를 함유한 고정 완충액으로 처리하여 프로테아제와 같은 세포 단백질을 가교하고 오네오세포의 구조적 무결성을 보존합니다. 고정 완충액을 제거합니다. 광표백을 피하기 위해 어둠 속에서 형광 BODIPY 기반 염료와 함께 배양합니다.
배양하는 동안 비극성 염료는 오노세포의 세포막을 가로질러 확산되고 지질 방울을 둘러싼 단층을 가로질러 통과합니다. 염료 분자의 소수성은 지질 방울의 비극성 코어로 이동하여 중성 지질과 결합할 수 있도록 합니다.
명확한 시각화를 위해 소식세포가 현미경 슬라이드에 닿도록 표본을 슬라이드에 장착합니다. 커버슬립을 사용하여 샘플을 밀봉하고 형광 현미경으로 관찰합니다.
493나노미터의 파장에서 청색광에 의해 여기되면 염료는 503나노미터에서 녹색 형광을 방출합니다. 녹색 형광 반점은 지질 방울의 존재를 확인합니다.
지질 방울 염색의 경우, 해부된 표피를 고정 완충액에 회전 장치에서 실온에서 30분 동안 배양한 다음 PBS 1밀리리터에 빠르게 재현탁합니다. 그런 다음 세척당 PBS 1밀리리터로 5분 세척을 3회 세척하여 잔류 고정액을 제거합니다.
마지막 세척 후, 표피 샘플을 적절한 친유성 프로브와 함께 회전 장치에서 실온에서 30분 동안 배양합니다. 배양하는 동안 샘플 튜브를 호일로 감싸 조직을 빛으로부터 보호하고 샘플을 1밀리리터의 PBS로 세척당 10분 동안 세 번 세척합니다.
오에노세포를 이미지화하려면 각 표피 샘플을 깨끗한 현미경 슬라이드의 6마이크로리터 장착 매체로 옮깁니다. 오네노 세포가 포함된 내부 표면이 슬라이드 바닥에 닿도록 조직의 방향을 조정합니다. 표피에 커버슬립을 부드럽게 놓고 투명한 매니큐어로 가장자리를 밀봉합니다. 광택제가 건조되면 적절한 여기 및 방출 파장으로 63X 배율로 공초점 현미경으로 샘플을 이미지
화합니다.전체 스크립트를 보고 수천 개의 과학 동영상에 액세스하세요