Masson Goldner Trichrome Staining: 심혈관 섬유증 감지를 위한 심장 절편의 콜라겐을 시각화하는 기술

스트레스에 의해 활성화된 심장 섬유아세포는 손상된 부위에 과도한 콜라겐을 침착시키는데, 이는 심장 기능을 손상시키는 섬유증이라고 합니다.

섬유증의 정도를 시각화하려면 먼저 파라핀 포매 심장 블록을 절편합니다. 슬라이드에 섹션을 배치합니다. 슬라이드를 가열하여 파라핀을 녹여 절편이 접착되도록 합니다.

슬라이드를 자일롤에 담그고 조직을 탈파라핀화합니다. 절편을 내강하는 알코올 강도로 처리하여 절편을 재수화하고 수성 염색 성분의 후속 결합을 돕습니다.

단백질을 가교하는 산성 고정제에서 절편을 배양하여 조직 구조를 안정화시킵니다. 잔여 고정액을 제거하기 위해 물로 헹굽니다.

슬라이드를 헤마톡실린 용액에 담그십시오. 양이온성 염료는 음전하를 띤 DNA에 결합하여 핵을 파란색으로 염색합니다. 과도한 얼룩을 제거하기 위해 물로 헹굽니다.

양전하를 띤 세포질 단백질 및 콜라겐과 상호 작용하여 빨간색으로 염색하는 소분자 음이온 염료인 산성 Fuchsin-Ponceau에서 슬라이드를 배양합니다. 과도한 얼룩을 제거하기 위해 희석된 아세트산으로 처리하십시오.

슬라이드를 포스포몰리브드산-오렌지 G 용액에 담그십시오. 저분자 염료인 오렌지 G는 적혈구를 주황색-빨간색으로 염색합니다. 고분자 산인 포스포몰리브드산은 콜라겐에서 저분자 염료를 배출하여 무색으로 만듭니다.

자가 콜라겐 섬유에 결합하여 녹색으로 착색하는 연한 녹색 염료에 절편을 배양합니다. 현미경으로 보면 섬유화 부위가 녹색으로 나타나 과도한 콜라겐 침착을 나타냅니다.

이 절차에서는 수동 마이크로톰을 사용하여 파라핀 블록에서 5미크론 두께의 조직 절편을 준비합니다. 다음으로, 각 쥐에 대해 각 심장 섹션에서 하나의 슬라이드를 Masson-Goldner Trichrome 염색으로 염색합니다. 파라핀 절편의 경우 오븐에서 섭씨 60도에서 조직을 녹입니다. 흄 후드 아래에서 자일롤에서 각각 10분 동안 두 번 파라핀을 제거합니다.

그런 다음 100% 에탄올, 95% 에탄올, 70% 에탄올, 증류수에 각각 3분 동안 재수화합니다. 탈파라핀 절편과 냉동 절편의 경우 밤새 Bouin 용액에 고정합니다. 다음날 아침, 흐르는 수돗물에 10-15분 동안 헹굽니다. 그런 다음 증류수를 사용하여 다시 헹굽니다.

Bouin의 고정은 훌륭한 Goldner 염색을 보장하는 가장 중요한 단계입니다.

Mayer의 헤마톡실린에서 3분 동안 배양합니다. 3분 후 슬라이드를 제거하고 증류수에 5분 동안 그대로 둡니다. 그런 다음 퐁소산 푹신에서 5분 동안 배양한 후 1% 아세트산으로 1분 동안 헹굽니다.

그런 다음 절편을 포스포몰리브드산 오렌지 G에서 1분 동안 배양한 다음 1% 아세트산으로 1분 동안 헹굽니다. 연한 녹색 염료에서 10분 동안 배양한 다음 1% 아세트산으로 1분 동안 헹굽니다. 마지막으로 절편을 70% 에탄올로 30초 동안, 95% 에탄올에서 30초, 100% 에탄올에서 5분 동안 순차적으로 탈수합니다. 수지 마운팅 매체 한 방울을 조직 절편에 바르고 커버슬립으로 덮은 다음 건조시킵니다.