Picrosirius Red Polarization Staining: 명시야 현미경을 사용하여 심장 조직 절편에서 섬유증을 감지하는 기술

섬유증은 손상된 조직의 세포외 기질에 섬유질 콜라겐의 침착이 증가하는 것입니다. 구조적으로는 삼중 나선 콜라겐 폴리펩티드 사슬로 구성됩니다.

피크로시리우스 레드 염료로 콜라겐을 염색하려면 파라포름알데히드 고정, 파라핀 포매, 심장 조직 절편을 채취하십시오. 조직 절편을 유기 용매인 자일렌에 담가 주변 왁스를 녹입니다.

자일렌을 대체하기 위해 감소된 알코올 농도로 탈파라핀화된 조직을 순차적으로 처리합니다. 조직을 물에 담그고 수분을 보충하여 후속 단계에서 더 나은 얼룩 시각화를 제공합니다.

음이온성 아조 염료인 Sirius red와 피크르산이 함유된 picrosirius red 용액에 조직을 담그십시오.

시리우스 레드에는 콜라겐에 존재하는 라이신, 하이드록시라이신 및 아르기닌의 염기성 아미노 그룹과 상호 작용하는 산성 설폰 그룹이 포함되어 있습니다. 피크르산은 산성 pH를 유지하는 데 도움을 주어 염료 분자가 콜라겐과 평행 방향으로 결합하는 것을 촉진합니다.

산성화된 탈색 용액으로 슬라이드를 헹구어 과도한 얼룩을 제거합니다. 슬라이드에 마운팅 매체 한 방울을 떨어뜨리고 명시야 현미경으로 관찰합니다.

콜라겐 함유 섬유화 부위는 섬유화되지 않은 노란색 부위에 비해 밝은 빨간색으로 보입니다.

심장 조직을 고정한 후 조직 절편 장치에 놓고 2mm 두께의 조각으로 자른 다음 절편을 매립 카세트에 넣습니다.

텍스트 프로토콜에 따라 파라핀 포매 및 추가 절편 후 슬라이드를 자일렌이 담긴 탱크에 30분 동안 넣어 탈파라핀화합니다. 그런 다음 연차적으로 희석된 알코올 시리즈로 조직을 재수화한 다음 증류수를 공급합니다.

다음으로, 적절한 피크로시리우스 적색 용액을 사용하여 조직 절편을 완전히 덮고 1시간 동안 배양합니다. 그런 다음 0.5% 아세트산 용액을 사용하여 슬라이드를 두 번 헹구고 샘플을 무수 알코올로 두 번 헹굽니다.

샘플을 자연 건조하고 커버슬립이 있는 합성 수지에 장착합니다. 그런 다음 200X 배율의 현미경으로 가시광선을 사용하여 슬라이드를 이미지화합니다.