Mycolic Acid Variants의 박막 크로마토그래피 기반 분리: 극성에 따라 Mycobacterial 세포벽 지질을 분리하는 방법

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마이코박테리아 세포벽에는 알파 사슬이 보존된 장쇄 지방산인 다양한 변종의 마이콜산이 포함되어 있습니다. 베타 사슬에는 구조적 차이가 존재하여 서로 다른 마이콜산의 극성이 변합니다.

박층 크로마토그래피 또는 TLC(액체 크로마토그래피 기술)를 사용하여 변이를 분리하려면 마이코박테리아 세포벽 지질을 원하는 유기 용매에 넣습니다. 고정상 역할을 하는 얇은 흡착제 물질 층으로 미리 코팅된 TLC 플레이트의 바닥 근처에서 지질을 발견합니다.

유기 용매(이동상)가 들어 있는 용기 안에 플레이트를 넣고 액체 레벨이 샘플 스팟 아래에 있는지 확인하여 마이콜산의 조기 확산을 방지합니다.

실행 중에 이동상은 모세관 작용을 통해 플레이트에 있는 흡착제 층의 작은 기공을 통해 상승합니다. 결국 마이콜산은 용매에 용해되어 위쪽으로 이동합니다.

더 극성 마이콜산 변이체는 분자간 힘을 통해 극성 고정상에 일시적으로 흡착되어 상향 이동을 방해합니다. 극성이 낮은 마이콜산은 비극성 이동상에 남아 더 멀리 이동합니다.

이동의 차이로 인해 마이콜산의 변이가 개별 밴드로 분리됩니다.

완료되면 건조된 플레이트에 인화몰리브드산 염색을 뿌립니다. 플레이트를 가열하여 지질이 있는 상태에서 얼룩을 줄이고 밴드에 짙은 녹색을 부여합니다.

TLC로 샘플을 분석하려면 TLC 챔버의 한쪽 벽을 여과지로 덮습니다. 챔버 모서리에 바셀린을 추가하여 챔버를 밀봉합니다. 여과지 위에 용매 혼합물을 디캔팅하고 남은 용매를 TLC 챔버 바닥에 추가합니다. TLC 챔버를 최소 20분 동안 닫아 포화시킵니다

.

한편, 유리관의 지질을 200-1,000마이크로리터의 클로로포름에 녹이고 모세관 유리관을 사용하여 10마이크로리터의 지질-클로로포름 현탁액을 TLC 플레이트에 직접 도포합니다. 샘플을 5분 동안 건조시킨 후 플레이트를 포화된 TLC 챔버에 삽입하고 이동상이 TLC를 통과하도록 합니다.

용매가 플레이트 상단에서 1cm에 도달하면 실리카가 완전히 건조될 때까지 플레이트를 층류 플럭스 아래에 놓습니다. 그런 다음 건조된 플레이트에 에탄올에 10% 몰리브다토인산 수화물 15-20밀리리터를 분사하여 플레이트가 밝은 노란색이 될 때까지 분사하고 플레이트를 섭씨 120도에서 2-5분 동안 가열합니다.

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Last updated: 18 July 2026