폴리아크릴아미드 겔 전기영동: 마우스 폐 조직에서 분리된 다양한 사슬 길이의 헤파란 황산염을 검출하는 분석 기법

헤파란 황산염(HS)과 같은 황산화 글리코사미노글리칸은 세포 표면 단백질에 부착된 다양한 사슬 길이의 음전하를 띤 선형의 황산화 다당류입니다.

마우스 폐 조직에서 분리된 다양한 길이의 HS를 추정하려면 젤 카세트 조립으로 시작합니다. 촉매제인 과황산암모늄 및 테트라-메틸-에틸렌-디아민을 포함한 고농축 아크릴아미드-비사크릴아미드 용액으로 부분적으로 채웁니다. 중합을 억제할 수 있는 공기 접촉을 방지하기 위해 물과 겹쳐 놓으십시오. 인큐베이트.

촉매제는 아크릴아미드-비사크릴아미드 중합을 유도하여 작은 기공 분해 겔을 형성합니다. 물을 버리십시오. 촉매제와 함께 저농도의 아크릴아미드-비사크릴아미드 용액을 첨가합니다. 젤 빗을 삽입하여 우물을 만듭니다. 용액이 중합되어 큰 기공 스태킹 젤을 형성합니다.

전기영동 중 최적의 전기 전도성을 위해 전기 영동 탱크의 챔버에 실행 버퍼를 로드합니다.

추적 염료와 자당을 포함하는 로딩 완충액에 HS 혼합물을 용해시킵니다. 다음으로, 이 혼합물과 표준 HS 사다리를 카세트 웰로 옮깁니다. 자당은 혼합물을 우물에 가둡니다. 염료는 전기영동 진행을 모니터링하는 데 도움이 됩니다.

저전압에서 전기영동을 시작합니다. 음전하를 띤 HS는 스태킹 겔을 가로질러 양전하를 띤 양극을 향해 이동하고, 기공 크기 차이로 인해 스태킹 분해 겔 계면에 집중됩니다.

전압을 높이십시오. 소쇄 HS는 분해 겔을 통해 빠르게 이동하여 더 멀리 이동하는 반면, 장쇄 HS는 겔 매트릭스 내에 갇혀 천천히 이동합니다.

전기 영동 후 젤을 염색합니다. HS는 별개의 밴드로 나타나며, 작은 사슬 HS는 장쇄 HS보다 낮은 위치에 있습니다. 개별 HS의 길이는 HS 표준과 비교하여 결정할 수 있습니다.

빈 카세트를 PAGE 탱크에 넣는 것부터 시작하십시오. 15밀리리터 튜브에 10밀리리터의 분해 젤 용액과 60마이크로리터의 새로 준비된 10% 과황산암모늄을 혼합하여 분해 젤을 주조합니다. 그런 다음 10마이크로리터의 TEMED를 추가합니다. 튜브를 2-3회 부드럽게 거꾸

로 합니다.

피펫을 사용하여 활성화된 폴리아크릴아미드 겔 용액 10밀리리터를 카세트에 빠르게 추가합니다. 2밀리리터의 탈이온화 여과수와 겹쳐서 분해 젤이 30분 동안 중합되도록 합니다.

분해 젤이 완전히 중합된 후 겹친 물을 버립니다. 15밀리리터 튜브에 3밀리리터의 스태킹 젤 용액과 90마이크로리터의 새로 준비된 10% 과황산암모늄을 혼합하여 스태킹 젤