0 조회수 • 4:21 분 • July 8th, 2025
미세유체 전기영동은 미세모세혈관 내에서 다양한 크기의 DNA 단편을 분리하는 기술입니다.
시작하려면 겔 기반 폴리머와 형광 염료, DNA 샘플 및 알려진 분자량 DNA 사다리의 혼합물을 위해 지정된 웰이 있는 다중 웰 미세유체 칩을 사용합니다. 이 우물은 마이크로채널 네트워크를 통해 상호 연결됩니다.
젤 염료 혼합물을 할당된 웰에 분배합니다. 빈 주사기가 미리 장착된 프라이밍 스테이션에 칩을 조립합니다. 주사기 플런저를 누르고 압력을 가하여 젤-염료 혼합물을 분리 마이크로채널로 밀어 넣습니다.
칩을 제거하고 다른 구성 요소를 해당 웰에 피펫팅합니다. 샘플 크기를 보정하는 내부 표준인 마커를 사다리와 샘플이 포함된 웰에 추가합니다.
마이크로칩을 조각 분석기에 삽입하여 칩을 실행합니다. 일단 내부로 들어가면 인가된 전압은 전기영동력을 생성하여 샘플을 웰에서 샘플 로딩 마이크로 채널로 구동하여 이 채널과 분리 채널 사이의 교차점에 도달합니다. 전류는 샘플이 분리 마이크로 채널에 들어가는 데 도움이 됩니다.
형광 염료 분자는 분자 크기에 비해 서로 다른 전기영동 속도로 양극을 향해 이동하는 음전하를 띤 DNA 단편을 삽입합니다. 결과적으로 단편은 형광을 발하는 다양한 크기의 밴드로 분리됩니다.
레이저 기반 검출기는 각 밴드의 형광을 측정하고 이를 서로 다른 크기의 DNA를 별개의 피크로 표시하는 전기 페로그램으로 기록합니다.
시작하기 전에 DNA 염료 농축액, DNA 겔 매트릭스, DNA 마커, DNA 래더 및 정제된 DNA 샘플을 실온에 둡니다. 주사기를 교체하고 베이스 플레이트를 조정하여 프라이밍 스테이션을 설정합니다. 그런 다음 주사기 클립의 레버를 풀고 상단 위치로 밉니다.
사이징 소프트웨어를 시작하고 젤-염료 혼합물을 준비합니다. 염료 농축액을 10초 동안 소용돌이치고 아래로 회전시킵니다. 그런 다음 25마이크로리터의 염료를 젤 매트릭스 바이알에 넣고 용액을 소용돌이쳐 혼합합니다.
젤 염료 혼합물을 스핀 필터로 옮깁니다. 원심분리기에 넣고 1,500배g에서 10분간 회전시킵니다. 겔-염료 혼합물을 로드할 준비가 되면 새 DNA 칩을 프라이밍 스테이션에 삽입하고 "G"로 표시된 웰에 9마이크로리터의 겔-염료 혼합물을 추가합니다.
프라이밍 스테이션을 닫고 플런저가 1밀리리터 표시에 위치하는지 확인합니다. 클립에 고정될 때까지 주사기 플런저를 아래로 누릅니다. 정확히 30초 동안 기다린 다음 클립을 놓습니다. 5초 더 기다린 다음 플런저를 천천히 다시 1밀리리터 위치로 당깁니다.
프라이밍 스테이션을 열고 "G"로 표시된 웰에 9마이크로리터의 젤 염료 혼합물을 추가합니다. 사다리 기호로 표시된 웰과 12개의 샘플 웰 각각에 5마이크로리터의 마커를 추가합니다.
사다리 기호가 있는 우물에 사다리 1마이크로리터를 추가하고 샘플 웰에 PCR 산물 또는 물 1마이크로리터를 추가합니다. 칩을 1분 동안 2,400RPM으로 소용돌이치게 합니다. 바이오 분석기에 삽입하고 5분 이내에 칩을 실행합니다.