Liquid Phase Isoelectric Focusing: Crude Gymnema sylvestre 추출물에서 생체 활성 분자를 분리하는 전기영동 기술

사전 조립된 등전 초점, IEF 셀(액상 전기영동 장치)으로 시작합니다. 이 컬럼은 끝에 뚜렷한 양극 및 음극 단자가 있는 구획화된 수평 다공성 챔버입니다.

이제 분자의 순 전하가 0인 pH인 다양한 등전점을 가진 서로 다른 전하를 띤 성분의 복잡한 혼합물을 포함하는 식물 추출물을 가져 가십시오.

추출물은 나중에 샘플 성분의 분별을 용이하게 하는 가변 전하의 양쪽 전해질로 보충됩니다.

컬럼의 로딩 포트에 샘플을 로드합니다. 현재 IEF 컬럼의 pH는 일정합니다. 다음으로 고전압을 가하여 전기영동을 시작합니다.

전기장 아래에서 가용성 양쪽 전해질은 반대 전하를 띤 전극을 향해 이동하고 컬럼 전체에 선형 pH 구배를 설정합니다. 샘플 성분은 액상 pH 구배를 통해 이동하기 시작하고, pI보다 낮은 pH에 위치한 성분은 순 양전하를 띠고 있습니다.

이들은 구성 요소가 pI에 도달할 때까지 음극을 향해 이동하고, 여기서 전하가 중화되고 이동이 중지됩니다. 유사하게, pI보다 높은 pH의 성분은 양극을 향해 이동하고 pI에 도달하면 멈춥니다. 이것은 pI를 기반으로 샘플 구성 요소를 집중된 구획으로 분리합니다. 추가 분석을 위해 정제된 분획을 수확합니다.

0.6ml의 증류수에 60g의 Gymnema sylvestre 식물 추출물을 첨가합니다. 식물 추출물을 롤러 튜브에 5분 동안 혼합하여

불용성 입자를 제거하려면 용액을 10,000 x g에서 5분 동안 원심분리합니다. 상청액을 150밀리리터 유리 비커에 옮기고 양쪽질을 첨가하여 부피 기준 1%, 약 0.6밀리리터의 용액을 만듭니다.

50밀리리터 주사기와 1.5인치, 19게이지 무딘 끝 바늘을 사용하여 샘플 수집 포트를 통해 용액을 IEF 셀에 로드합니다. 그런 다음 스탠드에서 셀을 제거하고 전극 챔버를 두드려 기포를 제거하고 제거합니다.

장치를 냉각수에 연결합니다. 일정한 15와트에서 전력이 공급되면 분별을 시작합니다. 전압이 일정한 값에 도달할 때까지 IEF 장치를 약 3시간 동안 실행합니다.

Harvest ON 버튼을 누른 후 분획 수집기 핀을 수집 포트에 맞춥니다. 밀봉 테이프를 통해 핀을 밀어 Gymnema sylvestre 분획 수집을 시작합니다.