Mobility Shift Affinity Capillary 전기영동: 단백질-리간드 복합체의 차등 이동에 따른 샘플-리간드 상호 작용을 분석하는 방법

금속 이온과 같은 리간드는 특정 단백질에 비공유 결합하여 단백질-금속 이온 복합체를 형성합니다. 이 결합은 단백질의 전체 전하를 변경하여 친화성 모세관 전기영동을 사용하여 이러한 복합체의 특성화를 가능하게 합니다.

시작하려면 내부 표면에 전하를 띤 실라놀 그룹이 있는 얇고 사전 조정된 유리 모세관을 가져 가십시오. EDTA 용액으로 모세관을 헹굽니다. EDTA는 금속 이온 불순물을 제거하는 킬레이트제입니다. 이제 원하는 단백질이 포함된 샘플 용액을 양극 끝 또는 양극에서 모세관에 유체역학적으로 주입합니다.

고전압을 가하여 전기 삼투압 흐름을 생성하여 고유한 전하가 있는 기본 형태의 단백질이 모세관 내부에서 음극 쪽으로 이동하도록 합니다. 모세관에서 결합되지 않은 단백질의 이동 패턴을 기록합니다.

다음으로, 단백질 샘플과 함께 모세관에 특정 리간드 용액을 도입하고 동일한 전압을 가합니다. 모세관 내부에서 리간드 분자는 표적 단백질에 비공유 결합하여 복합체를 형성합니다.

이는 단백질의 구조적 변화를 유도하여 고유의 전하를 변화시키고 전하 대 크기 비율에 영향을 미칩니다. 이러한 변화는 모세관의 전하를 띤 표면과의 상호 작용을 조절하여 결합되지 않은 단백질과 다르게 흐르게 합니다.

단백질-리간드 상호 작용의 강도와 상관관계가 있는 전기영동 이동성의 이러한 변화를 기록합니다.

리간드를 사용하지 않는 측정 방법을 준비한 후, 먼저 0.1몰 EDTA 용액을 사용하여 모세관을 2.5bar에서 1분 동안 헹구어 리간드를 사용한 측정 방법을 준비합니다. 그런 다음 탈이온수를 사용하여 모세관을 헹굽니다. 다음으로, 리간드 용액을 사용하여 모세관을 2.5bar에서 1.5분 동안 헹구어 모세관을 평형화합니다.

그런 다음 아세타닐리드 용액을 0.05bar에서 6초 동안 주입하고 입구 및 출구 바이알을 리간드 함유 완충 바이알로 변경합니다. 아세타닐리드 용액을 모세관 끝에서 더 밀어 넣기 위해 2.4초 동안 0.05bar를 도포합니다. 10.0킬로볼트를 6분 동안 가하고 200나노미터의 파장에서 아세타닐리드 피크를 검출합니다.

이전과 같이 EDTA, 탈이온수 및 리간드 용액으로 모세관을 헹군 후 단백질 샘플을 주입하고 입구 및 출구 바이알을 신선한 리간드 함유 완충 바이알로 변경합니다. 궁극적으로 리간드를 사용하거나 사용하지 않고 측정을 반복합니다.