Name: 마우스에 영구 중간 대뇌 동맥 내고의 응용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 27 s
Description: 배우세요 마우스에서 중대뇌동맥 결찰을 이용한 국소성 뇌허혈 연구 방법을. TTC 염색이나 MRI로 뇌경색을 시각화하고 단백질 발현 분석에 활용할 수 있습니다.

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수술 기술은 원래 조지아 메디컬 대학에서 박사 윌리엄 D. 힐의 연구실에 인수되었다. 저자는 또한 절개 카메라의 사용에 대한 데이빗 A. Rempe 및 란다 Prifti 감사하고 싶습니다. 이 연구는 NIH NS041744, NS051279, F31 NS064700 및 AHA 30815697D 지원했다.

이 프로토콜은 연구에 동물의 윤리적 사용 (UCAR)에 전념 로체스터위원회의 대학에 의해 승인되었습니다. 무균 기법은 프로토콜 동안에 따라야한다. 무균 장갑과 마스크의 사용이 필요합니다. 프로토콜 동안 사용되는 모든 장비, 재료, 화학 물질 및 도구는 표 1에 설명되어 있습니다. 1. 사전 수술 준비 <ol><li> 즉시 수술 후 후 처음 24 H 포스트 수술 기간 동안 매일 3-5 H, buprenorphine (0.05mg/kg) 수술 전에 2 H와 subcutaneously 쥐를 주사. </li><li> 압력솥의 모든 수술기구, 거즈 스폰지, 그리고 면화 팁 applicators을 소독. 바로 사용하기 전에 멸균 거즈에 건조 수술과 공기 중에 70 % 에탄올에 수술 도구를 보관하십시오. 70 % 에탄올로 작업 영역을 스프레이. </li><li> 마취 기화기를 사용하여 3 % isofluorane - 20 %의 산소 기체 혼합물로 마우스를 마취. 유량계와 산소 금액을 조정합니다. 발가락이나 꼬리 곤란 (그들은 응답한다)에 의해 마취의 수준을 테스트합니다. 2퍼센트 (V / V) isofluorane과 마취의 수준을 유지합니다. </li><li> 마우스의 눈에 인공 눈물을 적용하고 수술 중에 눈을 손상을 방지하기 위해주의를 사용합니다. 가로 위치의 오른쪽에있는 마우스를 놓습니다. </li><li> 왼쪽 눈과 동물 가위를 사용하여 왼쪽 귀의 기본 사이에 왼쪽에있는 영역을 쉐이브. betadine 솔루션과 면화 팁 applicators과 가볍게 지역을 바르고을 사용하여 70 % 에탄올 사이의 교류에 의해이 지역을 정화. 필요에 따라 반복합니다. </li><li> 37 체온을 유지하기 위해 직장 탐침에 연결된 손난로 ° C.에 마우스를 놓고 미네랄 오일을 사용하여 직장 프로브를 삽입합니다. </li><li> 현미경의 오른쪽에 마우스를 위치하고 테이프로 고정하십시오. 거즈 스폰지에 창문을 잘라 외과 영역을 커버. </li></ol> 2. 수술 및 MCA 내고 <ol><li> 왼쪽 눈 및 좋은 직선 가위를 사용하여 왼쪽 귀의 기지 사이에 수직 절개를합니다. 외과 영역을 넓히려고 곡선 hemostats를 사용합니다. </li><li> 스프링 가위를 사용하여 시간적 근육에 수평 절개를 만들고 약간 천천히 포셉로 당겨 두개골에서 관자놀이 근육을 분리. </li><li> 굽​​은 집게와 턱뼈를 누른 상태에서 18G 바늘을 사용하여 광대뼈 아치와 squamosal 뼈의 교차점에 작은 subtemporal craniotomy하십시오. </li><li> 뼈 rongeurs와 함께 두개골의 작은 조각을 제거하여 MCA을 폭로. 광대뼈 아치와 궤도 내용은이 과정에서 손상되지 않습니다. 조직의 과도한 건조는이 과정에서 발생하면, 면화 팁 applicators과 멸균 PBS를 적용합니다. </li><li> 작은 선박 cauterizer를 사용하여 MCA의 말초 부분을 Ligate. </li><li> 원래 위치로 다시 관자놀이 근육을 놓고 수술 5-0 나일론 봉합과 절개 사이트를 닫습니다. </li><li> 마취를 중단하고 직장 프로브를 제거합니다. subcutaneously buprenorphine (0.05mg/kg)의 두번째 복용량으로 마우스를 주사. 난방 패널 ° C 37 보관했던 케이지 마우스를 반환합니다. </li><li> 밀접하게 어떤 불편 (감소 식욕 / 물 소비, hunched 자세, 호흡 증가, 머리카락을 pilo가 - 건설)에 대한 향후 24 H에 대한 마우스를 모니터합니다. 최대 24 시간에 buprenorphine subcutaneously 매일 3-5 H 수술로 마우스를 주사. 이 기간 동안 복구 젤로 마우스를 제공합니다. </li></ol> 3. TTC의 스테 이닝과 뇌졸중 볼륨의 결정 <ol><li> 수술 후 스물넷 시간 깊이 마우스를 마취, transcardially 인산의 4% TTC (W / V)을 사용하여 10 분에 대한 4 % paraformaldehyde 솔루션 후 15 분 및 위해 호수 (PBS)를 버퍼로 마우스를 perfuse 중간 유량의 미니 연동이 펌프. 두뇌를 제거하고 밤새 4 % paraformaldehyde 용액에 넣습니다. </li><li> sectioning 블록에 머리를 놓습니다. 면도날을 사용하여 1mm 두께의 조각에 머리를 슬라이스. </li><li> 밀리미터 스케일 통치자 옆에있는 슬라이스를 놓습니다. 해부 현미경에 연결된 디지털 카메라를 사용하여 조각을 사진에 담아보세요. </li><li> 이미지 J 소프트웨어 (http://rsbweb.nih.gov/ij/)를 사용하여 contralateral 사이트의 전체 영역에서 ipsilateral 사이트의 비 infarcted 지역을 빼서하여 스트로크 영역을 계산합니다. 조각 22 스트로크 영역을 쌓아하여 스트로크 볼륨을 계산합니다. </li></ol> 4. 방향 이미지 J 소프트웨어를 사용하는 <ol><li> 파일 메뉴를 클릭하여 이미지 J 소프트웨어의 분석에 이미지 파일을 엽니다. </li><li> 프로그램의 '직선'탭을 클릭하십시오. 눈금자에있는 두 개의 여백 사이에 직선을 그립니다. '분석'메뉴를 클릭하고 '설정 규모'를 선택합니다. 1로 알려진 거리, mm로 길이의 단위를 설정합니다. </li><li> '프리핸드 원'탭을 클릭하십시오. contralateral 반구를 대략적으로 원을 그립니다. '분석'메뉴를 클릭하고 '측정'을 선택합니다. 계산 창이 그려진 동그라미의 영역을 보여주는 팝업됩니다. </li><li> ipsilateral 반구 제외 뇌졸중 (흰색) 주변 다른 원을 그립니다. 로 단계 4.3에 표시된 영역을 측정합니다. 새로운 값은 계산 창에 추가됩니다. 1, 2 가치의 차이는 아래의 수식으로 표시됩니다 경색의 영역을 나타냅니다. </li><li> 4.2-4.4 단계를 반복하여 각 슬라이스에서 스트로크 영역을 계산합니다. 각 슬라이스 (ΣA N)으로 계산 스트로크 지역의 변론을 가져가라. 이것은 각 슬라이스의 두께는 1mm있다는 사실을 알고 뇌졸중 볼륨을 나타냅니다. ΣA N X 1mm (각 슬라이스의 두께) = 뇌졸중 볼륨 </li></ol> 5. 대표 결과 : 마우스의 영구 MCA의 결합에 의해 얻은 infarcts는 대부분 대뇌 피질 있습니다. 그러나, 그것은 MCA가 lenticulostriate 지점 근위 출혈도 잡았 경우 subcortical 병변을 얻을 수 있습니다. MCA 내고 후 뇌졸중 볼륨 10mm ³에서 35mm ³ 19 23 달라질 수 있습니다. 스트로크 볼륨 23 35mm 20mm ³ ³하는 사이 Filiano 외의 MRI 이미지에서 결정하면서 Moyanova 외의 TTC의 얼룩과 계산 스트로크 볼륨. 19 22mm 10mm ³ ³로 사이에있다. 아마 내고의 정확한 위치 및 스트로크 볼륨을 측정하는 데 사용되는 다른 방법이 차이에 사용할 수있는 이유. 그림 1에서, 야생의 유형 C57/BL6 마우스에서 TTC 자국 두뇌 24 시간 게시물 영구 MCA의 결합이 표시됩니다. 뇌졸중 사이트 모양 (그림 1A, B)에 흰색입니다. 그림 1A와 B는 서로 다른 각도에서 경색 사이트를 보여줍니다. 그림 2는 (그림 2A - G) 후부에 앞쪽에에서 TTC 스테인드 스트로크 두뇌의 1mm 두께의 조각 보여줍니다. 경색 부피 24 H 수술 후 계산되었다. 경색의 볼륨 ~ 23mm ³이다. <img src="/files/ftp_upload/3039/3039fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 스트로크 사이트입니다. AB의 표현, TTC는 MCA의 결합 후 전체 뇌 이미지, 24 H를 더럽 혔다. 화이트 영역 경색을 나타냅니다. <img src="/files/ftp_upload/3039/3039fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 대표 결과입니다. (A&gt; G), TTC 스테인드 1mm 두뇌 섹션, MCAL 후 24 H. 조각은 뒷부분에 앞쪽에에서 정렬됩니다. 화이트 영역 경색을 나타냅니다.

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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

영구 MCA의 결합 방법은 높은 재현성 경색 볼륨과 사용 가능한 다른 방법에 비해 증가 이후 수술 생존 속도를 제공합니다. 절차의 간편하고 짧은 기간 (~ 30 분)는 더욱 실용적합니다. 방법은 널리 마우스 및 쥐 모두에서 사용됩니다. 이 기술은 stereomicroscope 아래 침략 수술을 필요로합니다. 따라서 현미경으로 운영하고 성공적인 craniotomy을 완성 경험이 필수적입니다. 실험이 수행되기 전에 연구실에서 일관성 infarcts를 확립하는 것이 좋습니다. 재현성 결과를 달성하기 위해서는 똑같은 위치에서 매번 MCA를 ligate하는 것이 중요합니다. MCA는 subcortical infarcts이 원하는 경우에는 지점을 lenticulostriate하는 근위 출혈도 잡았해야합니다. 동맥 완전히 출혈도 잡았 및 폐색은 영구적입니다. 그러므로이 모델은 MCA를 통해 reperfusion을 허용하지 않습니다. 이 예제에 포함되지 않지만, 그것은 도플러 프로브는 동맥...

<table border="1"><tbody><tr><th> NAME </th><th> 회사 및 카탈로그 번호 </th></tr><tr><td> A. 솔루션 및 화학 물질 </td><td></td></tr><tr><td> Povidone - 요오드 솔루션, 외과 스크럽 </td><td> Aplicare, 82-209 </td></tr><tr><td> 70 % 에탄올 </td><td> Koptec, V1001 </td></tr><tr><td> 2,3,5 Triphenyltetrazolium 염화 (TTC) </td><td> 시그마, T8877 </td></tr><tr><td> 4 % Paraformaldehyde </td><td> 전자 현미경 과학, 159SP </td></tr><tr><td> 7.4 : 인산이 살린, 산도를 버퍼 </td><td> 만든 실험실에서 살균. </td></tr><tr><td> 미네랄 오일 </td><td> PML Microbiologicals, R6570 </td></tr><tr><td> Isofluorane </td><td> 버틀러 회사, 029,405 </td></tr><tr><td> Buprenorphine (0.3mg/ml) </td><td> Hospira, NDC 0409-2012-32 </td></tr><tr><td> 인공 눈물 </td><td> 버틀러 회사, 007,312 </td></tr><tr><td> 복구 젤 </td><td> 지우기 H 2 O, 72-01-5022 </td></tr><tr><td> B. 외과 재료 및 장비 </td><td></td></tr><tr><td> 10-12주 오래된 C57/BL6 마우스, </td><td> 식민지는 대학 동식물 사육장에서 자랐다는 </td></tr><tr><td> 100 % 산소 탱크 </td><td> Airgas </td></tr><tr><td> 마취 기화기 및 유량계 </td><td> Surgivet, 모델 100 </td></tr><tr><td> 직장 프로브와 함께 가열 패드 </td><td> 파인 과학 도구, TR200 </td></tr><tr><td> 해부 현미경 </td><td> 자이스 혈구, Stemi 2000 </td></tr><tr><td> 난방 패널 </td><td> 페트코 서비스 (주) 0307-013 </td></tr><tr><td> 소형 선박 Cauterizer 세트 </td><td> 파인 과학 도구 18000-00 </td></tr><tr><td> 미니 연동 펌프 </td><td> 하버드 장치, MPII </td></tr><tr><td> 1ml 주사기 </td><td> BD, 329,650 </td></tr><tr><td> 18G의 바늘 </td><td> 백톤 디킨슨, 305,196 </td></tr><tr><td> 외과 5.0 나일론 봉합사 </td><td> Ethilon, 698H </td></tr><tr><td> 블록 Sectioning </td><td> 켄트 과학, 1mm </td></tr><tr><td> 단일 에지 면도날 </td><td> 전자 현미경 과학, 71962 </td></tr><tr><td> 라벨 테이프 </td><td> Scienceware, 벨 - 예술 제품 F13463 - 2075 </td></tr><tr><td> 거즈 스폰지 </td><td> 켄들 큐리티 2252, 존슨 앤드 존슨 6,415 </td></tr><tr><td> 커튼 팁 Applicators </td><td> 청교도 806 - WCL </td></tr><tr><td> C. 외과 도구 </td><td></td></tr><tr><td> 외과 스프링 가위 </td><td> 파인 과학 도구 15003-08 </td></tr><tr><td> Microdissecting 포셉는 직각 </td><td> 파인 과학 도구 45분의 5 </td></tr><tr><td> Microdissecting 포셉는 곡선 </td><td> 좋은 과학 도구 5 티 </td></tr><tr><td> 파인 직선 가위 </td><td> 파인 과학 도구 14568-12 </td></tr><tr><td> 곡선 뼈 rongeur </td><td> 파인 과학 도구 16021-14 </td></tr><tr><td> 하트먼 Hemostat가 휘어 </td><td> 파인 과학 도구 13003-10 </td></tr></tbody></table> 표 1. MCA의 결합 절차에 사용되는 재료, 도구 및 화학 물질의 목록입니다. A. 솔루션 및 화학 물질, B. 외과 재료 및 장비, C. 외과 공구를 추천하십시오.

마우스에 영구 중간 대뇌 동맥 내고의 응용

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

초점 대뇌 국소 빈혈 환자에서 볼 뇌졸중의 가장 일반적인 유형 중 하나입니다. 때문에 임상 중요성에 허혈성 모욕하는 동안 펼쳐 이벤트를 연구하기 위해 적절한 동물 모델을 개발하기 위해 장기간 노력하고있다. 이러한 기법은 가장 일반되는 설치류와 다양한 동물 모델을 사용하여 과도하거나 영구적인 초점 또는 글로벌 국소 빈혈 모델을 포함합니다. 또한 문학 pMCAo로 불리는 영구 MCA의 결합 방법은 설치류 1-6에 초점 국소 빈혈 모델로 광범위하게 사용됩니다. 이 방법은 원래 타무라 외 의해 쥐에 대해 설명했다. 1981 7인치 이 프로토콜에서는 craniotomy은 MCA와 근위 지역이 electrocoagulation에 의해 occluded되었습니다 액세스하는 데 사용되었다. infarcts는 폐색의 위치에 따라 대부분 피질과 때로는 striatal 지역을 포함하고 있습니다. 이 기술은 이제 잘 설립하여 많은 실험실 8-13에서 사용됩니다. 이 기술의 조기 사용 &quot;경색 코어&quot;와 &quot;penumbra&quot;14-16의 정의 및 설명을 주도하고, 그것은 종종 잠재 neuroprotective 화합물 10, 12, 13, 17을 평가하는 데 사용됩니다. 초기 연구는 쥐에서 수행 되었으나, 영구 MCA의 결합은 약간의 수정을 18-20로 생쥐에서 성공적으로 사용되었습니다. 이 모델은 재현성 infarcts 증가 후 생존 속도를 산출. 인간의 허혈성 뇌졸중의 약 80 %가 MCA 지역 21 일이되므로이 뇌졸중 연구의 관련성이 매우 모델입니다. 현재 뇌졸중 환자에 사용할 효과적인 치료법의 소수가, 따라서 잠재적인 약리 화합물을 테스트하고 생리적 결과를 평가하는 좋은 모델 필요가있다. 이 방법은 생체내 세포에서 hypoxia 응답 메커니즘을 연구하고 사용할 수 있습니다. 여기, 우리는 C57/BL6 마우스에서 MCA의 내고 수술을 제시한다. 우리는 미리 수술 준비, MCA의 결합 수술과 경색 볼륨 부량 위해 2,3,5 Triphenyltetrazolium 염화물 (TTC) 얼룩을 설명합니다.

중간 대뇌 동맥 (MCA) 내고 동물 모델에 초점 대뇌 국소 빈혈을 연구하는 기술입니다. 이 방법에서는, 중간 대뇌 동맥 craniotomy에 의해 노출 소작된에 의해 출혈도 잡았. 이 방법은 높은 재현성 경색 볼륨과 사용 가능한 다른 방법에 비해 증가 이후 수술 생존 속도를 제공합니다.

국소 뇌허혈은 환자들에게서 가장 흔하게 나타나는 뇌졸중 유형 중 하나입니다. 이러한 임상적 중요성으로 인해 ...를 위한 지속적인 노력이 이어져 왔습니다.

본 절차의 전반적인 목표는 동물 모델에서 국소 뇌허혈을 연구하는 것입니다. 이를 위해 먼저 왼쪽 눈과 귀 기저부 사이의 피부에 작은 절개를 가합니다. 다음으로, 중대뇌동맥을 노출시키기 위해 관골궁과 인상골이 만나는 지점에서 개두술을 시행하며, 이후 소혈관 소작기를 사용하여 중대뇌동맥을 결찰합니다.마지막으로, 상처 부위를 닫기 위해 피부를 봉합합니다. 결과적으로 생쥐 뇌의 좌반구에 경색이 위치한 결과를 얻을 수 있습니다. 뇌졸중 시각화를 위해 뇌를 TTC로 염색하거나 MRI를 사용하여 스캔할 수 있습니다.뇌졸중 뇌 조직은 단백질 또는 mRNA 발현량을 결정하는 데에도 사용할 수 있습니다. 안녕하세요, 저는 로체스터 대학교 Gale Johnson 교수님 연구실의 대학원생 Garza Chola입니다.이 방법은 허혈성 뇌 내 세포 사멸을 유도하는 기전을 설명하는 것과 같이, 뇌졸중 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 수술 준비를 위해 모든 수술 기구, 거즈 스펀지 및 인지 도포기를 오토클레이브로 멸균하십시오. 수술 중에는 수술 도구를 70% ethanol에 담가 보관하고, 사용 직전에 멸균 거즈 위에서 자연 건조하십시오.수술 2시간 전에 작업 구역에 70% ethanol을 분무합니다. 마우스에 buprenorphine을 kg당 0.05 mg 투여합니다. 약물은 수술 직후에 다시 투여하며, 이후 수술 후 첫 24시간 동안 3~5시간마다 투여합니다.마취 기화기를 사용하여 3% ISO fluorine과 20% oxygen 가스 혼합물로 마우스에 마취를 실시합니다. 유량계를 사용하여 oxygen 양을 조절합니다. 발가락이나 꼬리를 집어 마취 수준을 확인합니다.2% ISO fluorine를 사용하여 마취 수준을 유지합니다. 마우스의 눈에 인공눈물을 도포하며, 수술 과정 중 눈이 손상되지 않도록 주의하십시오.동물용 이발기를 사용하여 마우스를 오른쪽으로 눕혀 측면 자세를 취하게 합니다. 왼쪽 눈과 왼쪽 귀 기저부 사이의 왼쪽 부위를 삭모합니다. 면봉을 사용하여 Betadine 용액과 70% eth ethanol을 교대로 도포하고 해당 부위를 가볍게 문질러 세척합니다.반복이 필요합니다. 직장 프로브가 연결된 가열 패드 위에 마우스를 놓습니다. 체온을 37 °C로 유지하기 위해 미네랄 오일을 사용하여 직장 프로브를 삽입합니다. 마우스를 현미경 아래에서 오른쪽으로 눕힌 후 테이프로 고정합니다.거즈 스펀지에 창을 내고 미세 직선 가위를 사용하여 수술 부위를 덮습니다. 왼쪽 눈과 왼쪽 귀 기저부 사이에 수직 절개를 가합니다. 수술 중 조직의 과도한 건조가 발생하는 경우, 곡선 지혈집게를 사용하여 수술 부위를 개방 상태로 유지합니다.면봉을 사용하여 멸균 PBS를 도포합니다. 스프링 가위를 사용하여 측두근에 수평 절개를 넣고, 포셉으로 천천히 당겨 측두근을 두개골에서 약간 분리합니다. 곡선 포셉으로 턱뼈를 고정한 뒤, 18 gauge 바늘을 사용하여 관골궁과 인상골의 접합부에 작은 측두하 개두술을 실시합니다.골 런(bone run) 플라이어를 사용하여 두개골의 작은 조각들을 제거하고 MCA를 노출시킵니다. 이 과정에서 광대궁과 안와 내용물이 손상되지 않도록 주의해야 합니다. 소혈관 소작기를 사용하여 MCA의 원위부를 결찰하고, 측두근을 원래 위치로 되돌린 후 5-0 나일론 봉합사를 사용하여 봉합합니다.절개 부위를 봉합하기 위해 마취를 중단하고 직장 프로브를 제거합니다. 마우스의 피하에 부프레노르핀(buprenorphine) 2차 투여량을 주입합니다. 마우스를 37 °C로 유지된 케이지로 옮깁니다.가열 패널을 사용합니다. 이후 24시간 동안 식욕 또는 음수량 감소, 굽은 자세, 호흡 증가 또는 입모 현상을 포함하여 생쥐에게 불편함이 있는지 면밀히 관찰하십시오. 수술 직후 생쥐에게 회복용 젤을 제공하십시오.수술 후 2~3시간 동안 기다립니다. 그 후, 최대 24시간까지 3~5시간마다 마우스에 buprenorphine을 피하 주사합니다. 수술 24시간 후에 마우스를 깊게 마취시키고 4% TTC로 관류합니다.뇌를 적출하여 4% paraform aldehyde 용액에 담가 하룻밤 동안 고정합니다. 다음 날, 뇌를 섹셔닝 블록에 배치합니다. 면도날을 사용하여 뇌를 1 mm 두께의 절편으로 자릅니다.절편들을 밀리미터 scale ruler 옆에 놓습니다. 해부 현미경에 연결된 디지털 카메라를 사용하여, Image J 소프트웨어로 절편들을 촬영합니다.파일 메뉴를 클릭하고 원하는 사진을 엽니다. 프로그램의 직선 탭을 클릭합니다. 자의 두 마진 사이에 직선을 긋습니다.분석(analyze) 메뉴를 클릭하고 스케일 설정(set scale)을 선택하십시오. 알려진 거리를 1로 설정하고 길이 단위를 밀리미터(millimeter)로 설정하십시오. 프리핸드 원(freehand circle) 탭을 클릭하십시오.원형 도구를 사용하여 반대측 뇌반구를 외곽선으로 그립니다. 분석 메뉴를 클릭하고 측정(measure)을 선택합니다. 그러면 그려진 원의 면적을 나타내는 계산 창이 나타납니다.흰색 선 영역을 제외하고 동측 반구 주변에 또 다른 원을 그립니다. 이전과 동일한 방식으로 면적을 측정합니다. 새로운 값이 계산 창에 추가됩니다.첫 번째 값과 두 번째 값의 차이는 경색 부위의 면적을 나타냅니다. 슬라이스 두께를 1 mm로 하여 위의 단계를 반복함으로써 각 슬라이스의 뇌졸중 면적을 계산하십시오. 각 슬라이스에서 계산된 뇌졸중 면적의 합계를 통해 뇌졸중 부피를 계산하십시오.이 그림은 야생형 C 57 BL six 마우스에서 영구적 MCA 결찰 24시간 후의 TTC 염색 뇌를 보여줍니다. 뇌졸중 부위는 흰색으로 나타나며, 다양한 배율과 각도에서 확인할 수 있습니다. 여기에는 전방에서 후방 경색 부위까지 TTC 염색된 뇌졸중 뇌의 1 mm 두께 절편들이 제시되어 있습니다.부피는 수술 24시간 후에 계산되었습니다. 경색 부위의 부피는 약 23 cubic millimeters입니다. 이 기술은 적절하게 수행될 경우 30분 이내에 완료할 수 있습니다.시청해주셔서 감사합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

중간 대뇌 동맥의 폐색 Filamentous은 생쥐에서 허혈성 뇌졸중 공부를위한 일반적인 모델입니다.

마우스의 모델링 스트로크 - 필라멘트 모델 중간 대뇌 동맥 폐색

우리는 비디오 intraluminal monofilament를 사용하여 성인 마우스의 중간 대뇌 동맥 폐색을 생산하는 방법을 보여줍니다. 또한 2,3,5 - triphenyltetrazolium 염화물 (TTC) 염색법에 의해 대뇌 경색의 범위를 평가하는 방법을 보여줍니다.

중간 대뇌 동맥 폐색의 마우스 모델

쥐 intraluminal 중간 뇌성 가림 모델은 여기서 제공됩니다. 대뇌 경색의 범위는 neurologic 점수와 cresyl 보라색의 착색, TTC의 대안 얼룩, 병렬 많은 관심 마커에서 테스트 큰 이점을 제공함으로써 평가됩니다.

Intraluminal MCAO의 마우스 모델 : Cresyl 보라 착색에 의한 뇌 경색 평가

우리는 설치류의 주요 뇌 혈관의 영구 폐색에 대한 높은 재현성 방법을 설명합니다. 이 기술은 거의 주변의 손상을 최소화 혈액 손실, 장기 생존의 높은 속도, 인간의 임상 인구에 상응하는 일관된 경색 볼륨을 수행 할 수 있습니다.

영구적 인 뇌 혈관 폐색<em&gt;를 통해</em&gt; 더블 합자 및 절개

중대 뇌동맥 폐색 (MCAO)의 다양한 쥐 모델은 널리 실험 뇌 연구에 사용됩니다. 여기서 우리는 인간의 허혈성 뇌졸중의 대다수에 의해 부과 된 손상에 해당하는 크기의 일관성있는 대뇌 피질의 경색을 생산 두개 영구 원심 MCAO의 모델을 보여줍니다.

마우스의 모델링 스트로크 : 말초 중간 대뇌 동맥의 영구 응고

다음 스트로크 뇌 골수 세포 특성화 광학 분별 법을 이용하여 수행 Stereology를, 뇌의 유세포 분석에 의해 현탁액 백혈구 수있다. 둘 허혈성 뇌에서 발견되는 주된 서브 세트 골수 세포 표현형의 정확한 구별을 수행하는 유용한 기술이다.

일시적 또는 영구적 인 뇌허혈 모델에서 백혈구 부분 집단의 Stereological 및 유동 세포 계측법 특성

뇌졸중의 병태 생리를 이해하기 위해, 신뢰할 수있는 모델을 사용하는 것이 중요하다. 마우스에서 가장 자주 사용되는 뇌졸중 모델 중 하나를 설명한다 본 논문의 중간대 뇌동맥 폐색 (MCAO) 모델이라 재관류 (또한 관내 또는 필라멘트 봉합사 모델 지칭).

마우스의 중간 대뇌 동맥 폐색 및 재관류 유도 스트로크에 대한 수술 적 접근

말단 중간 대뇌 동맥 분기 (MCAO)의 수술 폐색 실험 뇌졸중 연구에서 자주 사용하는 모델입니다. 이 논문은 마우스에서 생체 내에 길이 현미경을위한 기회를 제공하는 측의 두개 창에 삽입, 결합 영구 MCAO의 기본적인 기술을 설명한다.

측면 만성 두개골 창 준비 활성화 생체 마우스의 말초 중간 대뇌 동맥 폐색에 따라 관측

이 프로토콜은 중간 크기의 경색과 우수한 생존율을 가진 독특한 마우스 스트로크 모델을 보여줍니다. 이 모델을 통해 전임상 뇌졸중 연구자는 허혈 기간을 연장하고, 노령 마우스를 사용하고, 장기적인 기능적 결과를 평가할 수 있습니다.

늙은 쥐의 뇌졸중 결과를 연구하기 위해 수정된 경두개 중뇌동맥 폐색 모델

여기에서는 C57BL/6J 마우스에서 경두개 전기응고를 통해 원위 중뇌동맥 폐색(dMCAO) 모델을 확립하고 후속 신경학적 행동 및 조직병리학적 특징을 평가하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

원위 중동맥 폐색 기법을 사용한 마우스의 급성 허혈성 뇌졸중 유도

본 연구의 목적은 쥐에서 두개골 절제술 후 영구적이고 선택적인 중뇌동맥 폐색을 수행하는 재현 가능한 방법을 확립하여 운동 및 공간 기억 결손에 대한 실험 연구에 적용하는 것이었습니다.

쥐의 중뇌동맥 선택적 및 영구 폐색: 운동 및 공간 기억 결손 연구를 위한 실험적 접근법

배우세요 마우스에서 중대뇌동맥 결찰을 이용한 국소성 뇌허혈 연구 방법을. TTC 염색이나 MRI로 뇌경색을 시각화하고 단백질 발현 분석에 활용할 수 있습니다.

마우스에 영구 중간 대뇌 동맥 내고의 응용

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