Virus-like Particles Capture Assay: 중화 항체 접합 마그네틱 비드를 사용하여 샘플에서 항원 표시 VLP를 분리하는 방법

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생물학적 기술

0 조회수 • 4:27 분 • July 8th, 2025

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중화 항체 또는 NAb는 침입하는 바이러스로부터 세포를 보호하기 위해 세포에서 분비됩니다.

NAb와 바이러스의 상호 작용을 연구하려면 조작된 바이러스 유사 입자(VLP)를 사용하십시오. 이러한 나노 크기의 구조에는 바이러스 유전 물질이 없는 바이러스 유래 단백질의 집합체가 포함되어 있어 전염성이 없습니다. VLP는 항원 외피 당단백질이 포매된 지질 이중층으로 둘러싸여 있으며, 이는 NAb가 결합하는 특수 영역인 중화 에피토프를 나타냅니다.

단백질 접합 마그네틱 비드에 결합된 중화 항체가 들어 있는 튜브에 VLP를 추가합니다. 구슬이 가라앉지 않도록 교반하면서 배양합니다. 배양하는 동안 VLP의 에피토프 영역은 NAb의 Fab 영역에서 상보적인 파라토프를 인식하여 항원-항체 복합체를 생성합니다. 이는 차례로 자기 비드가 VLP를 포착하는 데 도움이 됩니다.

강력한 자석이 장착된 분리 선반에 튜브를 놓습니다. 자기장의 영향 하에서 VLP와 복합체가 형성된 비드는 항원-항체 상호작용을 방해하지 않고 자석을 향해 이동합니다. 이 단계는 결합된 VLP를 포착하는 반면, 특정 항원이 부족한 VLP는 상청액에 남아 있습니다.

상청액을 버리고 세척 완충액으로 펠릿을 세척하여 결합되지 않은 VLP를 제거합니다. VLP-비드 복합체를 용출 완충액에 재현탁하면 VLP가 비드에서 분리되어 상청액에 나타납니다.

분리된 항원 표시 VLP를 새 튜브로 흡인하고 추가 분석을 위해 냉장

보관합니다. 위

아래로 피펫팅하거나 50RPM의 회전기에서 최소 5분 동안 혼합하여 마그네틱 비드를 재현탁하는 것으로 시작합니다.

한편, bNAb를 함유한 항체 용액을 준비한다. 반응당 각 bNAb 10마이크로그램과 항체 결합 및 세척 완충액 200마이크로리터를 사용합니다. 각 반응에 대해 50마이크로리터의 마그네틱 비드 용액을 1.5밀리리터 반응 튜브에 옮긴 다음 튜브를 마그네틱 분리 랙에 놓습니다.

비드가 튜브 벽에 모일 때까지 기다렸다가 모든 비드가 수집되었는지 확인한 다음 상청액을 제거합니다. 자석을 제거하고 이전에 준비된 bNAb 용액의 200마이크로리터에 비드를 현탁시킵니다.

실온에서 50RPM으로 회전 장치에서 혼합하면서 30분에서 3시간 동안 배양합니다. 배양 후 반응 튜브를 자기 분리 랙에 넣고 기다렸다가 상층액을 제거합니다.

자석에서 튜브를 제거하고 200마이크로리터의 항체 결합 및 세척 완충액에 재현탁하여 비드를 세척합니다. 항체 결합 및 세척 완충액으로 세척을 반복하고 완료되면 세척 완충액을 최대한 제거합니다.

비드 결합 bNAb에 샘플을 추가합니다. 추가된 샘플 부피가 1밀리리터 미만인 경우 PBS를 추가하여 샘플 부피를 1밀리리터로 조정한 다음 부드럽게 피펫팅하여 비드를 재현탁합니다. 샘플과 비드를 실온의 회전 장치에서 2.5시간 동안 배양하여 비드가 현탁액 상태를 유지하고 배양하는 동안 용액이 완전히 혼합되도록 합니다.

튜브를 자석 위에 놓고 상청액을 제거합니다. 그런 다음 마그네틱 비드를 200마이크로리터의 세척 완충액에 현탁시켜 세척합니다. 비드를 100밀리리터의 세척 완충액에 현탁시키고 현탁액을 깨끗한 내열 반응 튜브로 옮깁니다. 튜브를 마그네틱 분리 랙에 놓고 상청액을 완전히 제거합니다.

변성 SDS-PAGE 샘플을 준비하려면 20-80마이크로리터의 Laemmli 완충액에 비드를 현탁하고 섭씨 95도에서 5분 동안 배양합니다. SDS-PAGE를 직접 진행하여 튜브를 마그네틱 랙에 올려 용액에서 비드를 분리합니다. 또는 샘플을 섭씨 -20도에서 보관하십시오.

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마지막 업데이트: 1 8월 2026