유충 접촉 분석: 시험 유충 화합물과 직접 접촉 후 모기 유충 폐사율을 평가하는 절차

테스트 유충 살충 화합물의 잠재력을 평가하기 위해 도파민 수용체 길항제는 유충 접촉 분석을 사용하여 수성 배지에서 원하는 발달 또는 연령 단계의 살아있는 모기 유충으로 시작합니다. 동일한 수의 유충을 멀티웰 플레이트의 우물로 옮깁니다.

유충에 부정적인 영향을 미칠 수 있는 오염 물질의 간섭을 방지하기 위해 우물의 매체를 탈이온수로 교체하십시오. 증가하는 농도의 시험 화합물을 각 웰에 추가합니다.

유충과 테스트 화합물 사이의 접촉을 용이하게 하기 위해 플레이트를 부드럽게 소용돌이칩니다. 적절한 조건에서 플레이트를 배양합니다.

유충과 접촉하면 시험 화합물은 체벽 또는 가장 바깥층으로 들어가 중추 신경계를 구성하는 신경절(신경 세포 클러스터)에 연결된 기관계의 개구부인 기공에 도달합니다.

신경 세포에서 테스트 화합물은 중요한 세포 과정에 관여하는 도파민 수용체의 2차 결합 부위에 결합합니다. 이러한 결합은 도파민 수용체에 결합된 신경 전달 물질 도파민이 있더라도 수용체 활성화 및 다운스트림 신호 전달을 방지하여 유충 발달을 방해하여 궁극적으로 사망을 초래합니다.

다양한 화합물 농도에 걸쳐 테스트 화합물 노출 후 특정 시점에 각 웰에서 움직임이 없는 무반응 유충의 수를 기록합니다.

농도가 증가함에 따라 유충 사망률이 증가하면 시험 화합물의 유충 살충 가능성이 나타난다.

시작하려면 투명한 24웰 조직 배양 플레이트의 웰에 라벨을 붙입니다. 분석 저울을 사용하여 시험 화합물의 무게를 측정합니다. 그런 다음 화합물을 1.5밀리리터 튜브의 멸균 이중 증류수에 녹여 80밀리몰 원액을 만듭니다. 다음으로, 이중 증류수를 사용하여 원액을 연속적으로 희석하여 원하는 농도의 작업 원액을 준비합니다.

유충을 우물에 추가할 때, 과도한 물을 제거하는 동안, 테스트 화학 물질을 추가할 때 유충에 대한 물리적 손상을 방지하기 위해 주의해야 합니다. 부상은 사망률을 증가시켜 위양성 결과를 생성하거나 분석을 무효화할 수 있습니다.

와이드 보어 플라스틱 이송 피펫을 사용하여 5개의 3령 유충을 플레이트의 각 웰로 이송합니다. 그런 다음 1밀리리터 피펫을 사용하여 물을 부드럽게 제거하고 원하는 양의 이중 증류수로 교체합니다.

물을 제거할 때 유충을 만지지 않도록 주의하십시오. 유충이 건조되지 않도록 신속하게 작업하고 플라스틱 웰의 반대쪽에 피펫팅하여 테스트 화학 물질을 부드럽게 추가합니다.

각 웰에 적절한 양의 테스트 용액을 추가하고 플레이트를 부드럽게 회전시켜 균일한 혼합을 보장합니다. 플레이트를 성장 챔버에 넣고 섭씨 25도, 상대 습도 75%에서 85%의 12시간 명암 주기를 유지합니다.

유충의 움직임을 확인하려면 플레이트를 가볍게 두드리십시오. 움직임이 관찰되지 않으면 멸균 이쑤시개로 유충을 부드럽게 만지십시오. 반응이 발견되지 않으면 유충을 죽은 것으로 점수를 매기고 점수 시트를 사용하여 텍스트 프로토콜에 설명된 시점에서 각 웰에서 죽은 유충의 총 수를 기록합니다.