0 조회수 • 4:25 분 • July 8th, 2025
그람 음성 박테리아에서 지질다당류 내독소는 박테리아 외막의 필수 구성 요소입니다.
구조적으로 내독소는 O-항원(중앙 코어를 통해 내독소 활성에 중요한 면역자극 당지질인 지질 A에 연결된 가장 바깥쪽 다당류 사슬)으로 구성됩니다.
내독소 활성을 조사하려면 항지질 A 항체, 외인성 호중구 활성화제인 자이모산, 화학발광제인 루미놀을 포함하는 적절한 완충액이 담긴 시험관을 복용하십시오.
호중구를 포함한 내독소와 혈액 세포로 구성된 감염된 혈액 샘플의 최적 부피를 현탁시킵니다. 생리학적 조건에서 튜브를 배양합니다.
배양하는 동안 항지질 A 항체는 내독소의 지질-A 성분을 인식하고 항원 결합 도메인을 통해 이에 결합하여 항체-내독소 복합체를 형성합니다.
내독소 결합 항체의 FC 도메인은 호중구의 상보적 수용체에 결합하여 부착된 내독소를 호중구에 제시합니다. 이 결합은 호중구에 대한 프라이밍 자극 역할을 하여 활성화를 촉발합니다.
활성화된 호중구는 자이모산을 삼키고 면역 반응을 시작하여 호중구에서 활성 산소종인 ROS를 빠르게 방출합니다. 이러한 ROS는 루미놀 산화를 촉진하여 화학발광에 의한 빛 방출을 초래합니다.
화학발광 신호 강도는 혈액 샘플의 내독소 활성에 해당합니다.
먼저 사용할 EA 튜브를 튜브 랙에 놓고 캡을 제거합니다. 콤비 피펫을 사용하여 튜브 측면을 피펫팅하여 병에서 1밀리리터의 EA 시약을 튜브 번호 1, 2 및 3번으로 옮깁니다. 채혈관을 부드럽게 20회 뒤집어 환자의 혈액 샘플을 혼합합니다. 그런 다음 0.5밀리리터의 환자 혈액을 튜브 번호 4와 튜브 번호 5에 피펫팅합니다. 4번 소용돌이 튜브 번호 10초 동안.
모든 EA 시험관이 있는 튜브 랙을 인큐베이터 셰이커에 넣고 뚜껑을 닫고 섭씨 37도에서 10분 동안 배양합니다. 그런 다음 인큐베이터 뚜껑을 열고 셰이커에서 튜브 랙을 제거합니다.
와류 튜브 번호 5. 멸균 팁을 사용하여 40마이크로리터의 혈액을 1번과 2번 튜브에 이중으로 피펫팅합니다.
와류 튜브 번호 4. 동일한 피펫 팁을 사용하여 40마이크로리터의 혈액을 튜브 번호 4에서 튜브 번호 3으로 이중으로 옮깁니다.
6개의 최종 시험관을 하나씩 소용돌이칩니다. 튜브 랙을 인큐베이팅 셰이커에 다시 넣고 뚜껑을 닫습니다. 셰이커를 100RPM으로 설정하고 14분 동안 동작을 시작합니다.
EA 라벨이 붙은 칩 카드를 화학발광계에 삽입하고 '시작'을 누릅니다. 14분 배양 후 화학발광계에 표시된 지침을 따릅니다. 화학 발광계의 샘플 홀더에 놓기 전에 각 튜브를 10초 동안 부드럽게 소용돌이치십시오.
샘플 서랍을 열고 튜브 번호 1을 샘플 홀더에 넣습니다. 그런 다음 샘플 서랍을 닫고 상대 조명 단위 판독값을 기다립니다. 튜브 2와 3, 그리고 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 모든 복제본에 대해 이 판독 과정을 반복합니다.
모든 튜브가 처리되면 EA 결과가 자동으로 계산되고 인쇄됩니다.
테스트해야 하는 각 혈액 샘플에 대해 전체 분석 과정을 반복합니다. EA 분석 키트와 그 구성 요소는 원래 밀봉된 패키지에 섭씨 2도에서 25도 사이의 온도에서 보관하십시오.
본 연구에서는 화학발광 분석법을 사용하여 그람 음성균의 리포폴리사카라이드 내독소 활성을 조사합니다. 이 방법론은 항-lipid A 항체와 내독소 및 중성구의 상호작용을 통해 측정 가능한 면역 반응을 유도하는 과정을 포함합니다.
혈액 샘플 내의 엔도톡신 활성은 중증 환자의 패혈증 조기 진단을 위한 핵심 바이오마커로 작용하여 신속한 진단적 개입을 가능하게 합니다. 화학발광 기반 분석법은 호중구 활성화에 대한 민감하고 정량적인 판독값을 제공하여 항염증 치료제 개발의 타겟 검증을 지원합니다. 이 방법은 재현 가능하고 메커니즘과 연계된 면역 반응 데이터를 제공함으로써 전임상 모델에서의 예측 신뢰도를 높여줍니다.
본 분석법은 타겟 검증부터 전임상 효능 시험에 이르는 발견 연속체 내에 적합하며, 특히 그람 음성균 감염 경로를 표적으로 하는 면역 조절 화합물 연구에 유용합니다.
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마지막 업데이트: 29 8월 2026