0 조회수 • 4:38 분 • July 8th, 2025
외막에 존재하는 그람 음성 박테리아 독소인 내독소는 지질 A와 O-항원을 포함한 지질과 다당류로 주로 구성된 지질다당류(LPS)입니다. 감염 중에 방출되면 면역 체계에 의해 인식되어 사이토카인 기반 염증 반응을 유발합니다.
Limulus 아메바세포 용해물, LAL 분석을 사용하여 리포솜 약물 나노 제형에서 내독소 오염을 추정하기 위해 하나는 약물을 포함하고 다른 하나는 알려진 내독소 농도로 스파이크된 약물을 포함하는 반응 튜브를 준비합니다.
투구게, Limulus polyphemus, 혈액 세포 또는 아메바 세포에서 얻은 단백질 용해물을 함유한 LAL 시약을 첨가합니다. 용해물에는 비활성 세린 프로테아제(인자 B, 인자 C, 응고 효소)와 겔 응고 단백질인 응고가 포함됩니다.
튜브를 소용돌이치고 탁도계에 넣어 용액의 탁도를 측정합니다.
리포솜 약물에 결합된 오염된 LPS가 있는 경우 LPS 민감성 인자 C는 자가촉매적으로 활성화된 다음 응고 촉진 효소를 응고 효소로 전환하는 인자 B를 절단하고 활성화합니다. 이 활성화된 효소는 응고로겐 펩타이드 결합을 절단하여 응고린 단량체를 형성합니다.
결국, 단량체는 한 사람의 머리에 노출된 소수성 영역과 다른 사람의 소수성 꼬리 사이의 상호 작용을 통해 중합되어 불용성 탁한 응고린 겔의 응집 및 형성을 유도합니다. 측정된 탁도는 나노 제형의 내독소 농도를 결정하는 데 도움이 됩니다.
허용 범위 내에서 스파이크 및 테스트 샘플의 내독소 농도에서 계산된 스파이크 회수율은 나노 제형의 주요 간섭이 없음을 나타내며 나노 제형 약물에 내독소의 존재를 검증합니다.
교정 표준 준비의 경우 900마이크로리터의 Limulus Amebocyte Lysate 또는 LAL 등급 물과 100마이크로리터의 대조군 표준 내독소를 사용하여 필요한 만큼 중간 희석액을 준비하여 밀리리터당 1개 내독소 단위의 농도로 교정 표준물질을 준비할 수 있습니다.
그런 다음 900마이크로리터의 LAL 등급 물과 100마이크로리터의 1밀리리터당 내독소 단위 교정 표준물질을 사용하여 밀리리터당 0.1 내독소 단위 농도의 두 번째 교정 표준물질을 준비합니다.
그런 다음 연속 10배 희석을 반복하여 2개의 하위 교정 표준물질을 준비하여 밀리리터당 0.001에서 1 내독소 단위 범위의 총 4개의 교정 표준물질을 얻습니다.
밀리리터당 0.05 내독소 단위 품질 관리를 준비하려면 대조군 표준 내독소 용액 1밀리리터당 내독소 단위 50마이크로리터를 950마이크로리터의 LAL 등급 물과 결합합니다.
그런 다음 소프트웨어에서 '악기 설정'을 선택하고 템플릿을 만듭니다. '데이터 수집'을 선택하고 '일반' 탭에 테스트 ID와 데이터 그룹을 입력합니다. '하드웨어' 탭에서 기기 유형과 LAL 방법을 선택하고 일련 번호, 시스템 ID 및 일련 포트 정보가 화면에 나타나는지 확인합니다.
'확인'을 두 번 클릭하여 기기 선택 및 기기와의 통신을 확인하고 샘플을 테스트할 순서와 동일한 순서로 샘플 ID를 입력합니다. 그런 다음 기본 버튼을 사용하여 음성 대조군, 표준 곡선 및 테스트 샘플을 입력합니다.
적절한 양의 음성 대조군 교정 표준물질 및 품질 관리를 미리 라벨링된 이복 유리관에 추가하고 적절한 양의 LAL을 첫 번째 테스트 바이알에 추가합니다. 바이알을 잠깐 소용돌이치고 바이알을 기기 캐러셀의 적절한 테스트 슬롯에 넣습니다.
샘플을 로드하기 전에 시연된 대로 최대 유효 희석 내에서 테스트 나노 물질을 여러 번 희석하십시오.