0 조회수 • 3:56 분 • July 8th, 2025
장세포는 철분 흡수를 포함한 영양분 흡수에 중요한 역할을 하는 특수한 소장 세포입니다.
철분 생체이용률(생리적 기능에 접근할 수 있는 섭취된 철분의 비율)을 평가하려면 식품 샘플이 포함된 산성화 용액을 섭취하십시오. 이제 위장에서 단백질 소화 효소인 펩신을 추가합니다. 산성 pH에서 펩신은 복잡한 식이 단백질을 작은 펩타이드로 분해하여 위 소화를 시작합니다.
중탄산나트륨을 첨가하여 pH를 높이고 위 소화를 멈춥니다. 췌장 효소와 담즙이 포함된 용액을 첨가하여 장 소화를 시뮬레이션합니다. 혼합물을 2챔버 세포 배양 시스템의 상부로 옮깁니다.
하부 챔버에는 결장 선암종 세포주인 Caco-2에서 분화된 장세포가 포함되어 있습니다. 투석막은 상부 챔버와 하부 챔버를 분리합니다. 멤브레인은 저분자량 종의 확산을 허용합니다.
상부 챔버의 췌장 효소-담즙 혼합물은 탄수화물, 단백질 및 지질을 더 작은 서브유닛으로 분해하여 철 이온 형태로 철
분을 방출합니다.식품의 생체이용률 향상제는 방출된 철 이온을 철 상태로 전환하여 용해도를 증가시킵니다. 이 이온은 멤브레인을 통과하여 하부 챔버에 도달합니다.
장세포의 세포막에 있는 금속 이온 수송체는 철 이온의 흡수를 돕습니다. 일단 내부로 들어가면 철분은 철분 저장 단백질인 아포페리틴에 결합하여 복합체인 페리틴을 생성합니다. 철 생체이용률을 평가하기 위해 페리틴을 정량화하기 위해 세포를 수확합니다.
멸균 50밀리리터 원심분리기 튜브에서 샘플의 무게를 측정합니다. 염산을 사용하여 pH를 조절하고 염화나트륨 140밀리몰과 염화칼륨 5밀리몰을 함유한 생리식염수 10밀리리터를 첨가합니다. 그런 다음 준비된 돼지 펩신 용액 0.5밀리리터를 샘플에 첨가하여 위 소화 과정을 설정합니다.
다음으로, 섭씨 37도에서 1시간 동안 부드러운 설정에서 흔들린 셰이커에서 배양하고 1.0몰 중탄산나트륨으로 pH를 5.5-6.0으로 조정하여 각 샘플의 장 소화 과정을 시작합니다.
각 샘플 튜브에 2.5밀리리터의 췌장-담즙 용액을 첨가하고 1.0몰 중탄산나트륨으로 pH를 6.9-7.0으로 조정합니다.
140밀리몰 염화나트륨과 5밀리몰 염화칼륨이 함유된 용액을 사용하여 각 튜브에 정확히 15g의 총 물질이 포함되도록 액체를 첨가합니다.
이제 각 장 소화 1.5밀리리터를 6웰 배양 플레이트의 Caco-2 세포가 들어 있는 웰의 상부 챔버로 옮깁니다. 플레이트 커버를 교체하고 섭씨 37도에서 5% 이산화탄소에 있는 로킹 셰이커에서 분당 6회 진동으로 2시간 동안 배양합니다.
다이제스트가 있는 인서트 링을 제거합니다. 그런 다음 pH 7의 최소 필수 배지 1밀리리터를 각 웰에 추가하고 플레이트를 인큐베이터에 22시간 동안 다시 보관합니다.
이제 세포 배양 배지를 제거하고 세포 단층에 2밀리리터의 18메가옴(MΩ) 물을 추가합니다. 초음파 처리기로 옮기고 전체 세포 용해물을 세포 단백질 및 세포 페리틴 분석을 위해 미세 원심분리기 튜브로 수확합니다.