체외 SMC 수축 측정: 전기 세포 기질 임피던스 감지를 사용하여 평활근 세포 수축을 평가하는 비침습적 방법

0 조회수3:45 • July 8th, 2025

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대동맥 벽에는 주로 대동맥 혈류를 조절하기 위해 수축 및 이완되는 수축 단백질 기계를 포함하는 평활근 세포(SMC)가 있습니다.

시험관 내에서 대동맥 SMC의 수축 반응을 측정하려면 전기 세포-기판 임피던스 감지(ECIS) 센서 어레이가 포함된 멀티웰 플레이트를 얻습니다. 각 어레이에는 절연 필름으로 묘사된 웰 바닥에 금 필름 전극이 포함되어 있습니다. 젤라틴으로 우물을 코팅하십시오.

1차 인간 SMC 현탁액을 우물에 시드합니다. ECIS 함유 웰 플레이트를 증폭기 및 데이터 수집 시스템에 연결된 플레이트 홀더로 옮기면서 홀더와 전극 접촉을 보장합니다. 전극 사이에 작은 일정한 교류를 가하여 전극의 전위를 측정합니다.

배양하는 동안 SMC는 젤라틴 코팅에 부착되어 퍼집니다. 셀은 절연체 역할을 하여 전극 사이의 전류 흐름을 제한합니다. 더 많은 셀이 표면에 부착될수록 전류 흐름은 더욱 감소합니다. 결과적으로 임피던스 또는 전류 흐름에 대한 반대 및 전위가 증가합니다. 결국 세포는 전극에서 증식하여 단층을 형성합니다.

세포막을 가로지르는 칼슘 이온 수송을 촉진하기 위해 칼슘 이오노포어로 SMC를 처리합니다. 세포외 칼슘 이온 유입은 수축 장치를 활성화하여 수축을 유도합니다.

자극된 SMC는 전극에서 수축하고 세포 간 접촉을 잃습니다. 결과적으로 전극 표면 피복이 감소하면 임피던스가 감소하여 SMC 수축의 실시간 정량화가 용이해집니다.

자동 세포 계수기를 사용하여 세포를 계수하고 젤라틴 코팅 ECIS 플레이트의 SMC 배지 200마이크로리터에 웰당 30,000개 세포의 파종 밀도로 SMC를 삼중으로 시딩합니다. SMC가 있는 플레이트를 세포 배양 인큐베이터의 ECIS 96웰 홀더에 넣습니다.

"ECIS Applied Biophysics 소프트웨어"를 두 번 클릭하여 프로그램을 열고 "설정" 버튼을 누릅니다. " 구성"이라고 표시된 왼쪽 하단 패널에서 모든 전극이 홀더와 접촉하는지 확인하십시오. 전극이 제대로 연결되지 않은 경우 측정을 시작하기 전에 홀더의 플레이트를 조정하십시오.

이제 "어레이 유형"을 클릭하여 동일한 패널에서 플레이트 유형을 선택합니다. 다음으로, 2마이크로리터와 150마이크로리터 용량으로 설정된 두 개의 피펫을 준비합니다. 자극을 시작하기 전에 소프트웨어에서 "표시"를 누르고 주석을 남깁니다.

세포를 자극하려면 뚜껑을 제거하고 인큐베이터 내부의 멸균 표면에 놓습니다. 그런 다음 가능한 한 빨리 2마이크로리터의 이오노마이신 작업 용액을 각 웰에 피펫팅하여 SMC 수축을 유도합니다.

모든 세포가 자극되면 두 번째 피펫을 사용하여 웰에서 배지를 혼합합니다.

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마지막 업데이트: 15 8월 2026