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생물학적 기술
0 조회수 • 3:11 분 • July 8th, 2025
중증급성호흡기증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV-2) 감염 중에 바이러스 스파이크 단백질의 수용체 결합 도메인인 RBD는 숙주 세포 안지오텐신 전환 효소 2인 ACE2에 결합하여 바이러스 세포 진입을 촉진합니다. 이에 대응하여 면역 체계는 바이러스 RBD에 결합하여 세포 침입을 방지하여 바이러스 감염성을 감소시키는 항체를 생성합니다.
RBD 표적 SARS-CoV-2 항체를 검출하려면 SARS-CoV-2 스파이크 RBD에 융합된 작은 크기의 단백질 단편으로 구성된 재조합 바이오리포터 현탁액을 사용합니다. 표준 RBD 표적 SARS-CoV-2 항체 및 항체 결합 마그네틱 비드를 추가합니다.
배양하는 동안 Fc 항체 영역은 비드의 Fc 결합 도메인에 결합합니다. 또한 재조합 바이오리포터는 비드 결합 RBD 표적 SARS-CoV-2 항체에 결합합니다.
배양 후 혼합물을 원심분리합니다. 결합되지 않은 바이오리포터 함유 상청액을 제거합니다. 결합된 비드를 버퍼에 재현탁합니다. 멀티웰 플레이트로 옮깁니다.
작은 크기의 단백질 단편에 대한 친화력이 높은 큰 크기의 단백질 단편을 포함하는 용액을 추가합니다. 크고 작은 크기의 단백질 단편이 서로 결합하여 활성 조작 루시페라아제 효소를 형성합니다.
루시페라제 기질인 푸리마진을 첨가하십시오. 루시페라제는 푸리마진의 산화를 촉매하여 발광을 일으킵니다. 발광계를 사용하여 중화 항체의 존재를 나타내는 발광을 측정합니다.
높은 신호 강도는 RBD 표적 SARS-CoV-2 항체의 농도가 높다는 것을 나타냅니다.
HiBiT-RBD 항체 검출 분석을 수행하기 위해 HiBiT-RBD 바이오리포터를 준비하고 50마이크로리터의 HiBiT-RBD 함유 상청액과 1마이크로그램의 상용 SARS-CoV-2-RBD 항체를 1.5밀리리터 마이크로튜브에 결합합니다.
20마이크로리터의 면역글로불린 결합 단백질 또는 단백질 G를 용액에 첨가합니다. PBS를 추가하여 총 부피를 300마이크로리터로 만듭니다. 튜브를 튜브 셰이커 또는 로테이터에서 30분 동안 배양하고 12,000 x g에서 30초 동안 원심분리한 다음 상층액을 버리고 PBS로 세척합니다. 이 과정을 세 번 반복하여 무료 HiBiT-RBD를 제거합니다.
세포를 50마이크로리터의 PBS에 재현탁하고 96웰 플레이트로 옮깁니다. 50마이크로리터의 1x LgBiT를 넣고 5분 동안 기다립니다. 그런 다음 50마이크로리터의 1x NanoLuc 기질을 추가합니다. 즉시 발광계로 발광 신호를 읽으십시오.