0 조회수 • 3:03 분 • July 8th, 2025
세포 단백질 항상성 또는 단백질 정체는 잘못 접힌 단백질의 분해와 함께 단백질 접힘 및 기능의 조절을 포함합니다. 노화가 진행되는 동안 단백질정체 기계가 쇠퇴하여 잘못 접힌 단백질이 축적되고 더 응집되어 세포 기능 장애가 발생합니다.
연령 관련 단백질 정체 감소를 결정하려면 발달 동기화된 성인 형질전환 Caenorhabditis elegans로 시작합니다.
이 벌레의 근육 세포는 형광 태그와 융합된 비정상적으로 확장된 폴리글루타민 또는 polyQ 반복으로 단백질을 발현합니다. PolyQ 단백질은 잘못 접히기 쉽기 때문에 축적 시 응집체를 형성할 수 있습니다.
웜을 아가로스 패드로 구성된 현미경 슬라이드에 옮기고 살아있는 세포 이미징에 적합한 화학 물질로 고정시킵니다. 형광 현미경을 사용하여 일정 기간 동안 벌레의 체벽 근육을 시각화하여 형광 polyQ 응집체에 해당하는 밝은 형광 초점 신호를 결정합니다.
며칠 내에 연령 관련 단백질 정체 감소로 인해 점진적인 polyQ 응집체 축적이 발생하여 더 많은 수의 형광 병소가 발생합니다. 근육 세포에서 증가된 polyQ 응집체는 독성을 일으키고 근육 세포 기능을 방해하여 마비를 초래합니다.
현미경으로 기계적 자극에 따라 움직임이 없는 살아있는 마비된 벌레의 수를 기록합니다. 증가된 벌레 마비율은 벌레의 근육 조직의 연령 관련 단백질 정체 감소를 시사합니다.
근육 조직의 단백질 정체 감소를 측정하려면 20마리의 동물을 골라 3% 아가로스 패드와 5마이크로리터의 10밀리몰 아지드나트륨 방울이 있는 현미경 슬라이드에 장착합니다.
모든 벌레를 고정시킨 후 10배 배율 렌즈를 사용하여 동물의 전신을 이미지화합니다. 모든 동물에 대해 FITC 또는 YFP 필터와 동일한 노출을 사용하십시오. 완료되면 슬라이드를 버립니다.
동물 전체의 체벽 근육에 있는 병소의 수를 세십시오. 초점은 배경에서 더 어두운 용해성 신호와 구별할 수 있는 더 밝고 구두점이 있는 신호입니다.
채점하는 날에는 동물이 있는 접시를 보고 마비된 동물의 수를 기록합니다. 그런 다음 접시에서 마비된 동물을 제거합니다.
실험이 완료되면 각 조건에 대한 마비율을 계산하고 마비 진행을 표시합니다.