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생물학적 기술
0 조회수 • 3:01 분 • July 8th, 2025
눈물을 덮는 보호액인 눈물막은 안구 각막 상피 세포(CEC)를 윤활하고 건강하고 대사적으로 활동적인 상태로 유지하는 데 도움이 됩니다. 안구건조증과 같이 손상된 눈물막은 CEC에서 눈물 증발을 일으켜 감염 및 염증 손상에 대한 감수성을 증가시킬 수 있습니다.
인공눈물 제형은 눈물막을 안정화하고 수분 보유력을 향상시켜 세포 탈수를 예방합니다.
alamarBlue 분석을 사용하여 CEC에 대한 테스트 인공 눈물 제형의 세포 독성 효과를 스크리닝하려면 적절한 배지에서 인간 유래 CEC의 부착 배양으로 시작합니다. 미디어를 버립니다.
특정 농도의 인공 눈물 제형으로 세포 배양액을 배양합니다. 눈물 제형은 세포 위에 코팅을 형성합니다. 구성 성분의 누적 효과에 따라 세포는 대사 활동의 손실을 경험할 수 있습니다.
다음으로, 파란색, 약한 형광, 무독성, 수용성 염료인 레사주린을 함유한 alamarBlue 용액을 추가합니다.
레사주린은 세포 안으로 확산되고 호흡-대사 과정의 전자 공여자로부터 전자를 받아들이기 때문에 주로 미토콘드리아 환원효소에 의해 대사 활성 세포에서 돌이킬 수 없게 감소하여 분홍색의 고형광 레소루핀을 형성하여 세포에서 용액으로 자유롭게 이동합니다. 레소루핀 함유 용액을 신선한 멀티웰 플레이트로 옮깁니다.
형광 플레이트 리더를 사용하여 형광 강도를 측정합니다. 형광 강도 값이 낮으면 세포 대사 활동이 낮다는 것을 나타내며, 이는 CEC에 대한 눈물 제형의 바람직하지 않은 영향을 시사합니다.
웰에서 배양 배지를 제거하고 즉시 150마이크로리터의 테스트 제형 또는 배지 대조 용액으로 세포를 처리합니다. 그런 다음 세포를 30분 동안 배양합니다.
세포에서 시험 용액을 제거하고 0.5 밀리리터의 10% 대사 염료 용액을 첨가합니다. 세포를 4시간 더 배양합니다.
배양 후, 각 웰에서 100마이크로리터의 염료 용액을 제거하고 96웰 플레이트로 옮깁니다. 플레이트 리더를 사용하여 각 웰의 형광을 측정하고 여기를 540나노미터로, 방출을 590나노미터로 설정합니다.