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생물학적 기술
0 조회수 • 3:21 분 • July 8th, 2025
곤충 중장에는 장 산성화를 담당하는 구리 세포 영역인 CCR이 포함되어 있습니다. 이 영역에는 인접한 간질 세포에 의해 형성된 좁은 채널을 통과하는 산을 생성하는 특수 분비 세포(구리 세포)가 포함되어 있습니다. 산은 소화를 돕기 위해 장 내강으로 방출됩니다.
초파리의 장 산성화를 모니터링하려면 적절한 기간 동안 굶주린 성충 파리를 취하십시오. 브로모페놀 블루 또는 BPB(pH 감지 지시 염료)가 보충된 파리 먹이 한 방울이 들어 있는 페트리 플레이트에 파리를 넣습니다. 굶주린 파리가 일정 기간 동안 먹이를 찾도록 하십시오.
음식 섭취 후 구리 세포에서 생성된 산은 장 내강에 도달하여 BPB가 포함된 음식과 혼합됩니다. 산성 pH에서 BPB 분자는 양성자화되어 파란색에서 노란색으로 변하여 산성화를 나타냅니다.
실험 시간이 끝나면 페트리 플레이트를 얼음 위에 놓습니다. 낮은 온도는 파리의 신경근 활동을 멈추고 마취시킵니다. 개별 파리를 입체 현미경 아래에 놓고 손상되지 않은 소화관을 외과적으로 분리합니다.
CCR 색상을 검사하여 장 산성화 상태를 확인합니다. 노란색은 산성화를 나타내고 파란색은 산성화가 없음을 나타냅니다.
모든 파리의 소화관을 검사하고 장내 산성화를 보이는 개체의 비율을 계산하십시오.
pH 감지 브로모페놀 블루 또는 BPB 염료로 플라이 푸드를 준비하여 장 산성화 모니터링 분석을 준비하기 시작합니다. 그렇게 하려면 파리 먹이를 전자레인지에 녹이고 미지근해질 때까지 식히십시오. 미지근한 음식 1ml에 4% BPB 4ml를 넣고 잘 섞습니다. 피펫을 사용하여 BPB가 포함된 플라이 푸드를 페트리 접시 중앙에 있는 약 200마이크로리터의 단일 점에 추가합니다.
다음으로, 생후 0-2일 된 비처녀, 암컷, 초파리 멜라노가스터 파리를 수집하고 파리가 표준 옥수수 가루 사료로 회복되도록 합니다. 실험 전에 약 24밀리리터의 탈이온수에 적신 실험실 물티슈가 들어 있는 바이알에 파리를 실온에서 2시간 동안 굶주리게 합니다.
굶주린 파리를 2% BPB가 보충된 갓 준비한 파리 먹이의 단일 점이 들어 있는 페트리 접시에 옮겨 파리가 빛에 노출된 상태에서 실온에서 4시간 동안 먹이를 찾을 수 있도록 합니다.
4시간 후에 파리를 모으십시오. 그런 다음 실체현미경 하에서 겸자를 사용하여 1x PBS에서 마취된 파리의 내장을 외과적으로 분리합니다. 내장에 강력한 BPB 염색을 보이는 파리의 수를 세고 방정식을 사용하여 백
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