화학적으로 결합된 항체-항원 접합체를 검증하기 위한 효소 결합 면역흡착제 분석

면역 반응을 유도하기 위해 항원은 항원 흡수를 돕는 수지상 세포 또는 DC(항원 제시 세포) 표면에 존재하는 엔도사이틱 수용체에 특이적인 항체에 결합합니다.

항체-항원 복합체의 형성은 중요한 단계이며 항원을 DC 표적 단클론 항체에 화학적으로 결합함으로써 시험관 내에서 달성할 수 있습니다.

접합 공정의 효율성을 확인하려면 포획된 항체로 미리 코팅된 ELISA 플레이트부터 시작합니다. 코팅된 표면에 항원이 비특이적으로 결합하는 것을 방지하기 위해 차단 용액으로 플레이트를 처리합니다.

화학적으로 가교된 항체-항원 접합체를 플레이트에 추가하고 배양합니다. 항원의 특정 에피토프는 포획된 항체의 파라토프와 상호 작용하여 항체-항원-항체 복합체를 형성합니다.

다음으로, 효소에 연결된 세 번째 항체 세트로 플레이트를 오버레이합니다. 이러한 항체는 접합체에 존재하는 1차 항체에 특이적으로 결합하여 검출을 가능하게 합니다.

접

합체를 시각화하기 위해 발색 기질을 포함하는 완충액을 추가합니다. 항체에 부착된 효소는 기질과 반응하여 착색 제품을 생성합니다.

효

소를 비활성화하고 반응을 종료하는 산성화된 비활성화 용액으로 플레이트를 처리합니다. 플레이트를 분광 광도법으로 분석합니다. 유색 용액의 존재는 항체-항원 접합체의 존재를 확인하고 성공적인 접합을 확인합니다.

ELISA에 의한 접합의 성공을 검증하기 위해, 적절한 96웰 ELISA 플레이트를 웰당 100마이크로리터의 항-OVA 항체로 코팅하고, 차단 완충액에서 항-DEC-205/OVA를 1:2 비율로 연속적으로 희석하여 밀리리터당 6마이크로그램에서 밀리리터당 93.8나노그램까지 희석합니다.

각 희석액 100마이크로리터를 항체 코팅 플레이트의 적절한 웰에 첨가하여 실온에서 1시간 동안 배양합니다. 배양이 끝나면 항-DEC-205/OVA 접합체에 대한 양 고추냉이 과산화효소 접합 항체 100마이크로리터를 플레이트에 첨가하여 실온에서 1시간 동안 배양합니다.

그런 다음 각 웰에 50마이크로리터의 양 고추냉이 과산화효소 기질을 첨가하여 분광 광도법으로 색상 반응을 분석할 수 있습니다.