JoVE 실험 백과사전
생물학적 기술
0 조회수 • 6:19 분 • July 8th, 2025
유해 물질에 노출되면 세포 DNA의 단일 및 이중 가닥 절단이 유발되어 DNA 손상이 발생합니다.
DNA 손상을 검출하려면 액화된 저융점 아가로스에 화학적으로 처리된 세포의 단일 세포 현탁액으로 시작합니다. 현탁액을 유리 슬라이드에 로드하고 아가로스가 응고되도록 하여 다공성 겔 매트릭스 내에서 세포를 고정할 수 있습니다.
용해 완충액으로 세포를 처리합니다. 완충액의 세제는 세포막과 핵막을 가용화하는 반면, 염은 DNA에서 히스톤을 제거하여 핵 기질에 부착된 DNA를 포함하는 핵체를 형성합니다.
알칼리성 전기영동 완충액에서 슬라이드를 배양합니다. 이로 인해 DNA가 풀리고 단일 가닥 단편이 생성됩니다. 슬라이드를 전기영동 장치에 넣고 전원 공급 장치에 연결합니다. 이를 통해 음전하를 띤 DNA가 양극으로 이동할 수 있습니다.
손상되지 않은 DNA는 핵체 내에서 제한된 상태로 남아 있습니다. 대조적으로, 더 작고 손상된 DNA 단편은 양극 쪽으로 이동하기 시작합니다. 이러한 차등 움직임은 손상되지 않은 DNA가 머리를 형성하고 손상된 DNA가 혜성의 꼬리를 형성하는 혜성과 같은 구조를 형성합니다.
슬라이드를 중화 완충액에서 배양하여 단일 가닥 DNA 단편이 재생성되도록 합니다. 다음으로, DNA를 염색하는 형광 염료로 슬라이드를 처리합니다. 형광 현미경으로 슬라이드를 시각화합니다.
꼬리의 강도와 길이는 세포 DNA 손상 정도와 관련이 있습니다.
시작하려면 PBS에 0.6% 저융점 아가로스를 준비하고 섭씨 37도의 수조에 넣습니다. 유성 마커 또는 연필을 사용하여 사전 코팅된 슬라이드의 반투명 끝에 이름, 날짜 및 치료 정보를 표시했습니다.
평평한 벤치에 냉각판을 놓고 두 개의 냉동 냉각 팩을 금속 표면 아래의 슬라이딩 서랍에 삽입합니다. 그런 다음 슬라이드를 냉각판에 올려 1-2분 동안 미리 식힙니다. 샘플 튜브에서 상청액을 원심분리하여 제거하고 즉시 얼음 위에 다시 놓습니다. 세포 펠릿을 200마이크로리터의 0.6% 저융점 아가로스로 재현탁하고 피펫팅으로 혼합합니다.
다음으로, 80마이크로리터의 아가로스 함유 세포를 식힌 슬라이드에 추가하고 젤 위에 커버슬립을 빠르게 놓습니다. 젤을 냉각판에 1-2분 동안 고정시킵니다. 그 동안 용해 완충액의 작업 용액 500ml를 준비하여 용해 접시에 붓습니다.
젤이 굳은 후 엄지와 검지 사이에 슬라이드를 부드럽게 잡고 커버슬립을 젤에서 밀어서 커버슬립을 빠르게 제거합니다. 그
전체 스크립트를 보고 수천 개의 과학 동영상에 액세스하세요