웜의 세포 분획에서 피루브산 수치 추정을 위한 피루브산 분석

0 조회수2:29 • July 8th, 2025

에너지 생산 생화학적 경로의 핵심 중간체인 피루브산의 세포 수준은 효소 기반 비색 분석을 사용하여 추정할 수 있습니다.

비기생 선충인 Caenorhabditis elegans 세포의 피루브산 수치를 측정하려면 피루브산을 함유한 성충으로부터 준비된 세포 분획을 취하십시오. 용액을 처리하여 세포 단백질을 제거하고 피루브산을 함유한 정화된 세포 분획(테스트 샘플)을 수집합니다. 세포 단백질이 없기 때문에 피루브산 수치를 정확하게 측정할 수 있습니다.

먼저

효소 피루브산 산화효소와 양 고추냉이 과산화효소, 발색 염료를 포함하는 작업 시약을 추가합니다. 혼합물을 어두운 곳에서 적절한 시간 동안 배양합니다.

배양하는 동안 피루브산 산화효소는 기질인 피루브산과 반응하여 부산물로 과산화수소를 생성합니다. 빛이 없으면 과산화수소의 자연

분해가 방지됩니다.

양 고추냉이 과산화효소는 과산화수소와 발색 염료 사이의 반응을 촉매하여 착색 제품을 생성합니다. 착색 반응 생성물의 강도는 샘플의 피루브산 농도에 정비례합니다.

배양 기간이 완료되면 샘플을 플레이트 리더 내부에 넣고 흡광도를 측정합니다. 알려진 피루브산 농도의 연속 희석액을 사용하여 표준 곡선을 생성합니다.

테스트

샘플의 피루베이트 농도를 결정하기 위해 테스트 샘플의 측정된 흡광도 값을 곡선에 표시합니다.

비색 분석 키트를 사용하여 테스트 샘플의 피루베이트 농도를 측정하고 이중 검사를 수행합니다.

10마이크로리터의 테스트 샘플을 96웰 플레이트의 다른 웰에 추가하고 각 샘플에 90마이크로리터의 작동 시약을 추가합니다. 뚜껑을 덮고 실온에서 30분 동안 배양합니다. 그런 다음 플레이트를 마이크로플레이트 리더기에 넣어 570나노미터에서 각 웰의 흡광도를 측정합니다.

피루브산 표준 곡선을 플로팅하고 각 농도에 2.25를 곱하여 표준 곡선에서 피루브산 농도를 계산합니다.

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마지막 업데이트: 29 8월 2026