0 조회수 • 3:52 분 • July 8th, 2025
실시간 세포 분석(RTCA)을 사용하여 세포 거동을 지속적으로 측정하려면 웰 바닥에 임피던스 측정 금 미세전극 어레이가 포함된 RTCA 마이크로타이터 플레이트를 얻습니다. 세포 배양 배지를 웰에 조심스럽게 추가합니다.
전기 전도성 매체 내에서 미세 전극에 약한 전위를 가합니다. 전위는 미세 전극 사이에 전류를 흐르게 하여 매체의 고유한 전기 저항인 기준선 임피던스의 측정을 용이
하게 합니다.원하는 농도의 포유류 세포 현탁액을 배지 함유 웰에 피펫팅합니다. 세포가 웰에 균일하게 분포되도록 합니다.
배양하는 동안 세포는 우물 바닥에 부착됩니다. 미세 전극의 부착 셀은 절연체 역할을 하여 전류 흐름을 제한하고 임피던스를 증가시킵니다.
점차적으로 세포는 미세 전극에서 증식하여 기하급수적인 임피던스를 증가시킵니다.
합류 세포층 형성 후 세포는 영양 결핍을 겪고 죽음을 겪습니다. 결과적으로 셀이 미세 전극에서 분리되어 임피던스가 감소합니다.
지속적인 임피던스 측정은 세포 증식 및 사망을 포함한 세포 사건의 실시간 모니터링을 용이하게합니다.
세포 감염에 적합한 세포 양을 결정하기 위해, 세포를 PBS로 세척하기 전에 24시간, 약 80% 합류 MDCK 세포 배양을 준비하고, 섭씨 37도에서 플라스크당 0.25% 트립신-EDTA 3밀리리터에서 45분 동안 배양하여 수확합니다.
세포가 분리되면 플라스크당 7밀리리터의 신선한 배양 배지로 반응을 중지하고 각 배양액의 세포를 계산합니다. 세포를 세포 배양 배지 밀리리터당 4 x 105 세포로 희석하고 표시된 대로 세포를 2배 연속 희석합니다.
E-플레이트의 전극을 건드리지 않고 각 웰에 100마이크로리터의 세포 배양 배지를 추가하기 전에 E-플레이트를 실온에서 몇 분 동안 놓습니다. 크래들을 잠금 해제하고 플레이트 앞쪽 끝을 임피던스 측정 기기의 크래들 포켓에 삽입합니다. 인큐베이터의 문을 닫고 소프트웨어를 엽니다.
'기본 실험 패턴 설정'에서 선택한 크래들을 강조 표시하고 상단 페이지를 두 번 클릭하여 실험 이름을 입력합니다. "레이아웃"을 클릭하고 플레이트의 선택한 각 웰에 필요한 샘플 정보를 입력합니다. "일정" | "단계" |, " 단계 추가"를 클릭합니다. 소프트웨어는 배경 임피던스를 측정하기 위해 1초 단계를 자동으로 추가합니다.
"실행" 및 "시작/계속"을 클릭합니다. 다음 단계로 진행하기 전에 "플롯" 및 "추가"를 클릭하여 적절한 웰을 선택하고 배경 임피던스가 음수 0.1에서 0.1 사이인지 확인합니다.
다음으로, 크래들에서 플레이트를 제거하고 각 세포 현탁액 100마이크로리터를 적절한 웰에 이중으로 추가합니다. E-플레이트를 크래들 포켓에 넣기 전에 세포가 웰 바닥에 균일하게 분포되도록 E-플레이트를 실온에서 30분 동안 층류 후드에 그대로 둡니다. "일정" 및 "단계 추가"를 클릭하고 "시작/계속"을 선택하기 전에 30분마다 셀을 200회 반복하여 모니터링하는 값을 입력합니다.
세포 임피던스 데이터를 확인하고 플로팅하려면 "플롯"을 클릭하고 파종 후 24시간 동안 고정기 직전의 세포 농도를 선택하여 바이러스 감염 중에 아직 성장 단계에 있는 세포를 얻습니다.
본 논문은 실시간 세포 분석(RTCA)을 이용하여 세포 행동을 연속적으로 측정하는 방법을 설명합니다. 이 기술은 세포 배양액의 임피던스 변화를 모니터링하여 세포 증식 및 사멸을 평가하는 방식입니다.
실시간 임피던스 모니터링은 세포 역학의 연속적이고 무표지(label-free) 평가를 가능하게 하여, 초기 단계의 타겟 검증을 위한 증식 및 세포 독성에 대한 예측적 통찰을 제공합니다. 이러한 접근 방식은 리드 화합물 발굴 및 전임상 워크플로우에서 의사 결정(go/no-go decision)의 근거가 되는 정량적이고 재현 가능한 데이터를 제공함으로써 메커니즘적 리스크 감소를 지원합니다. 이 방법은 리소스 집약적인 후속 응용 단계에 앞서 질병 관련 시스템의 생물학적 모호성을 줄여 포트폴리오의 유효성을 높여줍니다.
실시간 임피던스 모니터링은 초기 표적 검증부터 리드 화합물 발굴, 전임상 평가에 이르는 발견 연속체에 적합하며, 세포 사건의 키네틱 분석 결과를 제공함으로써 각 단계에서 데이터 기반의 의사결정을 지원합니다.
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마지막 업데이트: 29 8월 2026