단일 분자 수준에서 항원-항체 상호 작용을 연구하기 위한 대량 측광

질량 광도계를 사용하여 항원-항체 상호작용을 검출하려면 먼저 원하는 농도의 정제된 항원과 항체를 필요한 시간 동안 배양하여 항원-항체 결합을 촉진합니다. 항원 결합의 화학량론에 기초하여, 이러한 항체의 파라토프 영역은 다양한 수의 부착된 항원을 가질 수 있다.

사전 조립된 흐름 챔버를 통해 항원-항체 복합체와 함께 유리 항체를 포함하는 용액을 흐릅니다. 챔버를 질량 광도계의 현미경 스테이지에 고정합니다. 그런 다음 최적의 이미징을 위해 흐름 챔버를 통해 레이저 빔을 향하게 합니다.

각 항체에 부착된 항원의 수에 따라 복합체의 분자량이 변합니다. 이러한 질량 변화로 인해 복합체는 빛을 다르게 산란시킵니다.

두 개의 항원이 단일 항체의 두 파라토프에 결합하는 더 높은 분자량을 가진 복합체는 단일 항원 함유 복합체에 비해 더 많은 빛을 산란시킵니다. 또한 유리 항체는 가장 적은 양의 광산란을 나타냅니다.

검출기는 산란된 빛을 수집하고 주파수와 강도를 측정합니다. 광도계는 산란광의 변동을 간섭 패턴으로 기록하여 이를 반점으로 나타냅니다.

희미한 반점은 유리 항체에 해당합니다. 대조적으로, 매우 어두운 반점은 두 개의 항원이 있는 복합체를 나타내고 덜 어두운 반점은 하나의 결합 항원을 포함합니다.

다크 스팟의 존재는 항원-항체 상호작용을 준수합니다.

질량 광도계로 항체-항원 친화도를 평가하려면 기기 대물렌즈에 현미경 침지 오일 한 방울을 바르고 플로우 챔버를 현미경 스테이지에 놓습니다. 10마이크로리터의 여과된 PBS를 플로우 챔버 채널의 한쪽 끝에 추가합니다. 버퍼는 모세관 작용에 의해 채널로 들어갑니다.

데이터 수집 소프트웨어의 초점 제어 탭에서 대략적인 s를 사용합니다.tage 이동 위 및 아래 버튼을 눌러 초기 조정을 수행하고 선명도를 클릭하여 선명도 신호 판독값을 봅니다. 미세한 위쪽 및 아래쪽 조정 버튼을 사용하여 선명도 값을 최대화하고 초점 설정 및 초점 고정을 클릭하여 초점 추적 기능을 활성화합니다. 깨끗한 슬라이드 이미지의 "신호" 값은 0.05% 이하여야 합니다.

시연된 대로 첫 번째 항체-항원 샘플 20마이크로리터를 로드하고 작은 압지로 다른 쪽 끝에서 액체를 닦습니다. 로드 즉시 Record를 클릭하여 100초의 데이터에 해당하는 적절한 프레임 수를 획득합니다. 데이터 수집 기간이 끝나면 데이터의 파일 이름을 입력하고 확인을 클릭한 다음 샘플을 클릭하여 파일을 저장합니다.

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