바이오레이어 간섭법은 무엇인가요?

바이오레이어 간섭법은 라벨 없이 실시간으로 바이오분자 상호작용을 측정하는 기술입니다.

바이오센서는 어떻게 작동합니까?

바이오센서는 센서 표면의 결합 사건으로 인한 빛 간섭 패턴의 변화를 감지합니다.

히스티딘 태그는 무엇인가요?

히스티딘 태그는 니켈 이온에 결합할 수 있는 짧은 펩티드 서열로, 바이오센서에 단백질을 고정시키는 데 사용됩니다.

파장 변화의 중요성은 무엇인가요?

파장 변화는 분자 결합으로 인한 광학 두께의 변화를 나타내며, 상호작용에 대한 정량적 데이터를 제공합니다.

이 방법을 다른 유형의 리간드에 사용할 수 있나요?

네, 이 프로토콜은 다양한 리간드와 분석물에 적용될 수 있어 다양한 연구 응용에 유용합니다.

리간드와 분석물 간의 상호 작용을 감지하기 위한 Biolayer Interferometry 기술

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biological Techniques

0 views • 5:13 min • July 8th, 2025

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생물층 간섭계(BLI)를 사용하여 리간드-분석물 상호 작용을 검출하려면 원하는 프로그램으로 설정된 BLI 기기 마운트에 고정된 수화 광섬유 바이오센서로 시작합니다.

바이오센서 팁은 니켈-니트릴로트리아세트산, Ni-NTA, 그룹으로 고정된 생체 적합성 층으로 코팅되어 있습니다. 바이오센서 팁을 버퍼에 담그십시오.

이 기기는 바이오센서를 향해 백색광을 방출하며, 이는 내부 기준 또는 광학 층과 생체 적합성 층의 두 인터페이스에서 반사됩니다. 반사된 빔은 서로 다른 빛 파장에서 건설적으로 또는 파괴적으로 간섭합니다. 광검출기는 결과 간섭 패턴을 감지합니다.

기본 간섭계 반응 측정 후 히스티딘 태그가 지정된 리간드 용액을 추가합니다. 히스티딘 태그는 바이오센서의 니켈 양이온에 결합하여 팁의 리간드를 고정시킵니다.

결합 후 방출된 백색광은 광학층에서 반사되고 생체 적합성 층은 끝에서 광학 두께가 증가한 리간드로 고정됩니다. 이로 인해 반사층 사이의 거리가 증가하여 간섭 패턴 이동 및 파장 이동이 발생합니다.

팁을 씻고 결합되지 않은 리간드를 제거합니다. 표적 분석물 용액과 함께 배양합니다. 분석물은 리간드에 결합하여 팁의 광학 두께를 더욱 증가시켜 파장 이동을 증가시킵니다.

바이오센서 팁을 완충액에 배치합니다. 팁에 고정된 리간드에서 분석물을 해리하는 동안 파장 이동을 기록합니다.

시간 경과에 따른 파장 이동의 변화를 모니터링하면 리간드와 분석물 간의 분자 상호 작용을 쉽게 연구

할 수 있습니다.

BLItz 기계를 켭니다. 기기 뒷면의 USB 데이터 출력 포트를 통해 기기가 컴퓨터에 연결되어 있는지 확인합니다.

컴퓨터에서 관련 소프트웨어를 열고 화면 왼쪽에 있는 "Advanced Kinetics"를 클릭합니다. 소프트웨어에서 각 제목 아래에 실험에 대한 모든 적절한 정보를 입력합니다. "바이오센서 유형"을 클릭하고 드롭다운 메뉴에서 "Ni-NTA"를 선택합니다. 각 단계의 기간은 필요에 따라 기본값에서 변경할 수 있습니다. 최적의 결과를 얻으려면 초기 기준선 및 기준선에 최소 30초, 연관 및 분리에 120초를 사용합니다.

PCR 튜브에서 수화된 니켈-NTA-바이오센서를 제거하고 바이오센서의 넓은 부분을 마운트 위로 밀어 기계의 바이오센서 마운트에 부착합니다.

0.5밀리리터 검정색 미세 원심분리기 튜브를 기계의 튜브 홀더에 넣고 400마이크로리터의 BLI 완충액을 피펫으로 넣습니다. 바이오센서 팁이 미세 원심분리기 튜브의 완충액에 잠기도록 기계 덮개를 닫습니다. 소프트웨어에서 "다음"을 클릭하여 초기 기준선 기록을 시작합니다.

초기 기준선 단계 기록이 완료되면 기기 덮개를 엽니다. 슬라이더를 오른쪽으로 이동합니다. 투석된 His 태그가 부착된 리간드 4마이크로리터를 드롭 홀더에 피펫팅하고 기계 덮개를 닫으면 자동으로 로딩 단계 기록이 시작됩니다.

로딩 단계 기록이 완료되면 기기 덮개를 엽니다. 슬라이더를 왼쪽으로 이동하여 튜브 홀더가 다시 한 번 검은색 화살표 앞에 위치하도록 합니다. 기계의 뚜껑을 닫고 바이오센서 팁이 튜브 홀더에 있는 튜브의 BLI 버퍼에 잠겨 있는지 확인합니다. 기계와 소프트웨어가 자동으로 기준선 단계 기록을 시작합니다.

기준 단계 기록이 완료되면 기기 덮개를 엽니다. 드롭 홀더를 제거하고 단백질을 피펫팅하고 이중 탈이온수로 총 5회 헹구어 세척합니다. 마지막 세탁 후 티슈 물티슈를 사용하여 드롭 홀더 표면을 청소하십시오. 드롭 홀더를 기기에 다시 장착합니다. 드롭 홀더가 다시 검은색 화살표 앞에 위치하도록 기기의 슬라이더를 오른쪽으로 이동합니다.

투석된 분석물 4마이크로리터를 드롭 홀더에 피펫팅하고 기계 덮개를 닫으면 자동으로 연관 단계 기록이 시작됩니다. 연결 단계의 기록이 완료되면 기기의 덮개를 엽니다. 튜브 홀더가 다시 한 번 검은색 화살표 앞에 위치하도록 기계의 슬라이더를 오른쪽으로 이동하고 기계 덮개를 닫으면 자동으로 해리 단계 기록이 시작됩니다.