센서 칩을 사용한 생체 분자 상호 작용을 연구하기 위한 표면 플라즈몬 공명

생체 분자 상호 작용을 연구하기 위해 표면 플라즈몬 공명(SPR)을 수행하려면 플로우 셀의 SPR 검출기 위에 센서 칩을 배치하는 것으로 시작합니다. 이 금속 코팅 센서 칩은 칩 표면에 하이드로겔 재료 층이 증착되어 있어 단백질 고정에 더 적합합니다.

하이드로겔과 상호 작용하여 표면에 고정되는 바이러스 펩타이드로 칩을 오버레이합니다. 비특이적 단백질 상호 작용을 방지하는 알칼리성 담금질 용액으로 세척하십시오.

광을 칩에 직접 전달합니다. 공명각에서 금속 전자는 이 빛을 흡수하고 공명하여 해당 반사각에서 반사된 빛의 강도를 감소시킵니다.

광검출기는 이 반사광을 수집하고 프로세서는 이 신호를 기준선으로 변환하여 시간에 대한 센서 응답을 나타내는 그래프인 센서그램을 생성합니다.

항바이러스제 용액을 플로우 셀에 흐르게 합니다. 흐름 중에 항바이러스제는 칩의 고정화된 바이러스 펩타이드와 상호 작용합니다. 이러한 연관성은 굴절률을 변경하여 반사광의 각도와 강도를 변경하여 궁극적으로 센서 응답을 초래합니다.

두 분자 간의 상호 작용을 방해하여 해리를 일으키고 센서 응답을 감소시키는 높은 이온 강도의 세척 완충액을 추가합니다.

센서그램의 모양을 분석하고 생체 분자 상호 작용에 중요한 두 분자의 결합 및 해리를 평가합니다.

듀얼 채널 SPR 시스템의 경우 HBS-EP+를 실행 완충액으로 사용하고 pH 1.5 - 1.6의 10밀리몰 글리신 염산을 재생 완충액으로 사용하고 기기 탈기 장치, 자동 시료 주입기 및 펌프를 켭니다. 그런 다음 전체 시스템을 이중 증류수로 1시간 동안 세척합니다.

다음으로, 검출기에 침지 오일을 떨어뜨리고 얇은 금막으로 코팅된 유리 센서 칩을 3포트 플로우 셀 아래의 검출기에 직접 카르복시메틸덱스트란 하이드로겔로 기능화한 유리 센서 칩을 장착합니다. 그런 다음 핸들링을 아래로 당겨 설정을 수정합니다.

단백질 리간드를 센서 칩에 고정하려면 메뉴 표시줄에서 양식을 클릭하여 실행 테이블을 열고 통합 SPRAutoLink 소프트웨어에서 테이블 편집기 실행 을 클릭합니다. 그런 다음 사용 가능한 실행 테이블 목록에서 BASIC_Immobilization를 선택하고 컴퓨터 화면의 실험 절차 단계를 따릅니다.

그런 다음 양식 섹션에서 샘플 세트 편집기를 클릭하여 추가 분석을 위해 자동 시료 주입기에 배치된 두 랙의 시약 목록을 작성합니다. 메뉴 표시줄에서 도구로 Autosampler Sampler Direct Control을 클릭하여 랙을 앞으로 또는 다시 집으로 가져오고 작동 온도로 섭씨 4도를 선택합니다.

도구 및 "펌프 직접 제어"를 클릭하여 펌프를 시작하여 이중 증류수를 주입하고 "SPR 기기 직접 제어"를 클릭하여 데이터를 기록하고 매번 새로 나타나는 창에서 시작합니다. 300마이크로리터 바이알에 커플링 시약을 추가한 후 자동 시료 주입기 랙에 넣고 실행을 클릭하여 실행 테이블을 시작합니다.

분당 25,000마이크로리터로 펌프를 리필한 후 간단한 단백질-단백질 상호작용의 경우 30초 동안 기준선 조정을 수행합니다. 활성화된 칩 표면을 1몰 에탄올아민 염산염(pH 8.5)으로 담금질하기 전에 1.5분 동안 이중 증류수로 후속 기준선 조정을 허용합니다. 그런 다음 튜브를 액체 샘플러에서 탈기기로 이중 증류수에서 HBS-EP+가 있는 병으로 전환합니다.

양식을 클릭하고 아래로 스크롤한 다음 이 작업 모드를 클릭하여 "후처리"로 변경합니다. 그런 다음 추가를 클릭하여 각 플로우 셀에 대한 데이터 플롯 양식에서 시간이 지남에 따라 생성된 바인딩 곡선을 선택하고 오버레이를 스크러버 파일로 내보냅니다. 그런 다음 파일을 클릭하여 파일 저장 옵션을 열고 왼쪽 및 오른쪽 곡선을 정렬하고 리간드 채널의 신호에서 두 번째 참조 채널의 신호를 빼서 응답 곡선을 얻습니다.