표지된 단백질-인지질 소포 상호작용을 연구하기 위한 정량적 유세포 분석

JoVE Encyclopedia of Experiments

생물학적 기술

0 조회수 • 2:43 분 • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

세포막의 단백질-인지질 상호작용은 여러 세포 과정의 조절에 매우 중요합니다.

정량적 유세포 분석을 사용하여 시험관 내에서 표적 단백질-인지질 상호작용을 검출하려면 원하는 농도의 세포막 모방체(미크론 크기의 친유성 염료 표지 인지질 소포)가 들어 있는 튜브를 완충액에 넣습니다.

용액에 적절한 농도의 다양한 형광 표지 표적 단백질을 첨가합니다.

현

탁액을 유세포 분석기에 주입합니다. 유체 시스템 매개변수를 낮은 유속으로 설정하여 단백질-인지질 상호 작용에 충분한 시간을 허용합니다.

형광 표지된 단백질과 인지질 소포가 유동 채널에서 상호 작용함에 따라 소포에 결합된 단백질의 농도가 증가합니다.

이러한 복합체는 적절한 파장을 제공하는 특정 형광 채널의 레이저 빔을 통과하면서 여기됩니다. 복합체의 이러한 여기된 단백질과 인지질 소포는 기저 상태로 이완될 때 각각의 형광 신호를 방출하며, 이는 적절한 검출기에 의해 포획됩니다.

단백질의 높은 평균 형광 강도의 검출은 단백질이 인지질 소포에 결합한다는 것을 나타냅니다.

Tyrode의 완충액에서 인지질 소포를 1마이크로몰의 농도와 총 부피 250마이크로리터로 희석하여 동역학 결합 실험을 시작합니다. 그런 다음 형광 표지 응고 인자 X 또는 fX-fd를 500나노몰 농도와 인지질 소포와 1:1 비율로 혼합하여 총 부피 500마이크로리터를 얻습니다.

500마이크로리터의 혼합 현탁액을 유세포 분석기에 즉시 488나노미터의 여기 파장과 585나노미터의 방출 필터, 채널 FL2의 경우 너비 42의 방출 필터

로 주입합니다.

다음으로, 633나노미터에서 여기를 사용하고 너비 20의 660나노미터에서 방출 필터로 채널 FL4의 평균 형광을 측정합니다. 결합의 포화도에 도달하면 Tyrode의 완충액으로 샘플을 20배 빠르게 희석하고 기준선 형광 또는 정체에 도달할 때까지 해리를 모니터링합니다.

11:22

3 색 단일 분자 무서 워를 사용 하 여 단백질 상호 작용의 상관 관계를 연구 하

관련 동영상

0 조회수

11:10

세제 없는 보완 청구 Proteoliposomes Fusogenic를 사용 하 여 지질 Bilayers에 막 단백질의 초고속 재구성.

관련 동영상

0 조회수

09:12

전체 혈액에 의해 인간 Monocyte 하위 집합의 Flow Cytometry 분석

관련 동영상

0 조회수

07:33

자기 활성 셀 정렬 (LIMACS)를 사용하여 지질 소포 - 중재 동질 크로마 토그래피 : 단백질 지질 상호 작용을 분석하는 소설 방법

관련 동영상

0 조회수

11:11

이분자 형광 보완의 유세포 분석 : 단백질 - 단백질 상호 작용을 연구하는 높은 처리량 정량 방법

관련 동영상

0 조회수

09:39

유동 세포 계측법을 사용하여 세포 외 소포의 분석을위한 기술

관련 동영상

0 조회수

10:52

고성능 액체 크로마토 그래피 결합 흐름 섬광에 의한 방사성 표지 및 Phosphoinositides의 세포 수준의 정량화

관련 동영상

0 조회수

11:32

유동 세포 계측법을 사용하여 재조합 이온 채널의 상대 셀 표면 및 전체 식의 결정

관련 동영상

0 조회수

10:58

PIP-on-a-chip : 단백질 - 포스 포이 노시 티드 상호 작용에 대한 라벨없는 연구

관련 동영상

0 조회수

08:38

신호 분석 및 바이오 마커 발견 하는 단일 셀에 대 한 형광 셀 바코드와 인 Cytometry

관련 동영상

0 조회수

마지막 업데이트: 1 8월 2026