세포막에서 나노막대의 확산 역학을 시각화하기 위한 암시야 현미경 검사

암시야 현미경을 사용하여 살아있는 세포막에서 금 나노로드 확산 역학을 조사하기 위해 단일 입자 추적과 결합된 DFM은 적절한 배지가 포함된 배양 접시에서 멸균된 커버슬립으로 시작합니다. 세포 현탁액을 커버슬립에 추가합니다. 배지는 세포 성장을 촉진합니다.

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전기 상호 작용을 통해 음전하를 띤 세포막에 흡착되는 양전하를 띤 금 나노로드와 함께 배양합니다. 접시에서 유리 슬라이드의 홈까지 배지를 피펫팅합니다. 커버슬립 셀을 홈에 놓고 밀봉합니다.

슬라이드를 암시야 현미경 스테이지에 놓습니다. 현미경은 특수 다크 필드 콘덴서 (darkfield condenser) 를 통과하는 고각 경사 빛으로 샘플을 비춥니다.

나노로드가 조명되면 나노로드 표면의 자유 전자는 입사광과 공명하는 주파수로 진동합니다. 진동 전자는 오브젝티브 렌즈에 의해 포착 된 특정 파장에서 빛을 산란시켜 나노로드 시각화를 가능하게합니다.

마찬가지로, 지질과 단백질로 구성된 세포막은 주변 매질보다 더 높은 굴절률로 입사광을 산란시켜 어두운 배경에 밝은 이미지를 생성합니다. 시계열 DFM 이미지를 캡처합니다.

적절한 소프트웨어를 사용하여 DFM 이미지에 대한 단일 입자 추적 분석을 수행하여 높은 시공간 해상도로 세포막을 통한 나노로드의 확산을 시각화합니다.

먼저 에탄올에 담근 유리 커버슬립을 불꽃에 태우고 페놀 레드가 없는 2밀리리터의 세포 배양 배지가 들어 있는 35 x 10mm 크기의 세포 배양 접시에 커버슬립을 넣습니다. 50마이크로리터의 관심 세포 현탁액을 커버슬립에 넣고 접시를 앞뒤, 좌우로 부드럽게 흔들어 세포를 고르게 분포시킵니다.

접시에 20마이크로리터의 CTAB 코팅 금 나노로드를 추가하기 전에 세포가 20%에서 40% 융합에 도달할 때까지 접시를 세포 배양 인큐베이터에 약 12시간 동안 넣습니다. 나노로드를 접시 전체에 고르게 분산시키기 위해 부드럽게 흔든 후 접시를 가습된 분위기에 5분 동안 놓습니다.

배양이 끝나면 접시에서 100마이크로리터의 상청액을 유리 슬라이드의 홈으로 천천히 옮기고 커버슬립 셀 면이 아래로 향하도록 슬라이드 홈에 조심스럽게 놓습니다. 그런 다음 커버슬립의 가장자리를 매니큐어로 밀봉하고 매니큐어를 건조시킨 후 슬라이드를 암시야 현미경 스테이지에 놓습니다.

암시야 현미경으로 단일 입자를 추적하려면 오일에 잠긴 암시야 콘덴서에 오일 한 방울을 놓고 콘덴서가 유리 슬라이드에 닿을 때까지 손잡이를 돌립니다. 커버 유리