특정 항원을 검출하기 위한 Raman 분광법 기반 직접 면역분석

리포터가 나노입자에 결합할 수 있도록 라만 리포터 염료 분자를 금 나노입자와 함께 배양하는 것으로 시작합니다.

표적 항원에 특이적인 PEG 접합 항체인 폴리에틸렌 글리콜을 첨가합니다. 항체는 금-이황화물 결합을 통해 나노입자에 공유 결합합니다. 티올 접합 PEG를 첨가하여 나머지 나노입자 부위를 차단하고 나노입자 응집을 방지하여 나노입자 프로브를 형성합니다.

면역분석 플레이트 웰을 표적 항원으로 코팅합니다. 단백질이 포함된 용액으로 나머지 플레이트 부위를 차단합니다. 나노입자 프로브를 추가합니다. 웰 전체에서 연속 프로브 희석을 수행합니다. 프로브의 항체가 항원에 결합하여 복합체를 형성하도록 배양합니다.

라만 현미경을 사용하여 프로브의 광학 반응을 결정합니다. 입사 단색 레이저는 금 나노입자의 표면 전자를 여기시켜 진동을 일으켜 프로브 표면에 높은 국부 전자기장을 생성합니다.

입사 빔과 라만 리포터는 상호 작용하여 향상된 전자기장으로 인해 파장과 주파수가 다른 비탄성광 또는 라만 산란을 유발합니다. 비탄성적으로 방출된 라만 신호는 라만 스펙트럼을 생성하는 데 사용됩니다.

프로브 농도에 대해 라만 리포터 피크의 스펙트럼 영역을 플로팅하여 프로브 검출의 하한을 찾고 항원의 보다 민감한 검출을 용이하게 합니다.

라만 프로브를 준비하기 위해, 먼저 두 개의 1.5밀리리터 배치의 금 나노입자와 라만 리포터를 첨부된 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 결정된 농도로 만든다.

이는 라만 리포터와 금 나노입자 용액을 결합하고 실온에서 30분 이상 결합하도록 함으로써 수행됩니다. 그런 다음 PEG화된 항체 용액을 리포터 결합 금 나노입자 용액 중 하나에 첨가하여 입자에 대한 항체 비율을 200:1로 만듭니다. 이 솔루션은 테스트 샘플을 위한 것입니다.

별도의 미세 원심분리 튜브에서 대조군으로 사용할 항원 대 입자의 200 대 1 비율로 다른 리포터 결합 금 나노입자 용액에 PEG화 항원을 추가합니다. 두 용액을 실온에서 30분 동안 배양합니다.

다음으로, 나노입자 표면의 나머지 부위를 차단합니다. 이를 달성하려면 먼저 HPLC 물을 사용하여 고체 메톡시 폴리에틸렌 글리콜 티올을 200마이크로몰 농도로 용해시킵니다. 티올이 완전히 용해될 때까지 용액을 소용돌이치십시오. 그런 다음 티올 용액을 나노입자 결합 PEG-항체 용액에 40,000 대 1 비율로 첨가하고 실온에서 10분 동안 배양하여 금 나노입자의 나머지 부위가 차단

되도록 합니