0 조회수 • 4:29 분 • July 8th, 2025
박테리아 제거를 촉진하는 필수 면역 세포인 호중구의 모집을 모니터링하려면 등의 결합 조직이 노출된 상처가 있는 마취된 형질전환 면역 저하 마우스부터 시작합니다.
형질전환 마우스의 호중구는 호중구 추적을 용이하게 하는 향상된 녹색 형광 단백질을 발현합니다. 또한 박테리아 죽이는 능력이 손상되어 마우스가 감염에 더 취약해집니다.
생물발광(발광 특성)을 가진 유전자 변형 박테리아 접종제를 예로 들어 보겠습니다.
상처 부위에 박테리아 접종물을 주입하여 결합 조직과 근막(결합 조직 아래의 섬유 조직층) 사이에 전달되도록 합니다. 주사 부위에서 박테리아가 증식하고 집락화하여 조직 감염을 일으킵니다.
감염에 대한 반응으로 면역 세포는 호중구를 유인하는 화학 신호 분자인 케모카인을 방출합니다. 호중구는 화학주성(화학적 유도 운동)을 통해 빠르게 이동하고 혈관을 통해 박테리아 감염 근처의 조직으로 혈관 유출됩니다.
각각 박테리아 부담과 모집된 호중구를 나타내는 생물 발광 및 형광 신호에 대해 마우스를 이미지
화합니다.시간이 지남에 따라 생물발광 및 형광 신호의 증가는 감염 부위에서 박테리아 부담 증가 및 지속적인 호중구 모집과 관련이 있습니다.
황색포도상구균 접종의 경우 28게이지 인슐린 주사기에 준비된 생물발광 박테리아 접종제 50마이크로리터를 채우고 손가락을 사용하여 부상당한 동물의 진피를 옆으로 당깁니다. 주사기를 조직과 거의 평행하게 잡고 근막 피어싱을 나타내는 저항의 갑작스러운 감소가 느껴질 때까지 주사기를 조직에 천천히 삽입합니다.
바늘을 상처 중앙에 놓고 접종제의 전체 부피를 천천히 전달합니다. 접종제가 누출이나 분산을 최소화하면서 상처 중앙에 기포를 형성하는지 확인하고 주사기를 동물에서 천천히 제거합니다. 그런 다음 완전히 회복될 때까지 온열과 모니터링을 통해 동물을 케이지로 돌려보냅니다.
상처 및 감염 후, 그리고 실험 중에 매일 마취된 마우스를 상처를 가능한 한 평평하게 하여 생물발광 및 형광 이미저에 넣습니다. 이미저 소프트웨어에서 이미징 모드로 Luminescence 및 Photo를 선택합니다. 노출 시간은 작은 비닝에서 1분, 발광의 경우 F/stop 1, 사진의 경우 F/stop 8, 방출 필터의 경우 Open으로 미리 설정해야 합니다. 그런 다음 획득을 클릭하여 이미지를 기록합니다.
생체 내 형광 이미징의 경우 이미징 모드로 형광 및 사진을 선택합니다. 노출 시간은 작은 비닝에서 1초, 형광의 경우 F/stop 1, 사진의 경우 F/stop 8, 높은 램프 강도로 각각 30나노미터에 대한 465 및 20나노미터에 대한 520의 여기 및 방출 파장으로 미리 설정되어야 합니다. 그런 다음 획득을 클릭하여 이미지를 기록합니다.
두 이미지 세트를 모두 얻은 후 완전히 회복될 때까지 모니터링하면서 동물을 케이지로 돌려보냅니다.
이미지 분석의 경우 적절한 이미지 분석 소프트웨어 프로그램에서 정량화할 이미지를 열고 주변 피부를 포함한 전체 상처 부위에 기본 원형 관심 영역을 배치합니다. 관심 영역 측정을 클릭하고 상처의 평균 플럭스 값을 기록하여 각 신호의 평균 플럭스를 시간 대비 플로팅할 수 있도록 합니다.
상처 치유를 측정하려면 상처 가장자리에 관심 있는 원형 영역을 맞추고 상처 면적을 센티미터 제곱 단위로 측정하여 기준선 대 시간에서 분수 변화를 플로팅할 수 있습니다.