0 조회수 • 3:50 분 • July 8th, 2025
덱스트란 황산나트륨(DSS)은 장 상피 장벽 파괴로 인해 염증이 발생하는 염증성 장 질환인 대장염을 유발합니다.
조직 손상을 평가하기 위해 DSS 유발 대장염의 쥐 모델에서 분리된 고정 결장 조직을 취하십시오. 쉽게 절편할 수 있도록 조직을 포매 배지에 담그고 빠르게 동결합니다.
cryo-microtome을 사용하여 얇은 조직 절편을 얻어 유리 슬라이드에 수집합니다.
매염제(금속 양이온)에 결합된 산화된 헤마목실린 염료가 포함된 용액에 슬라이드를 담그고 염료에 양전하를 부여합니다. 염료-매염제 복합체는 음전하를 띤 DNA에 결합하여 핵을 적자색으로 염색합니다.
조직을 분화 산-알코올 용액에 담그고 세포질 및 세포외 기질에서 비특이적으로 결합된 염료를 제거합니다. 알칼리성 매체인 블루잉제로 조직을 헹구어 핵에 파란색을 부여하여 대비를 강화합니다.
슬라이드를 알코올 농도를 증가시키는 데 담그면 조직이 탈수되어 대염색 침투가 강화됩니다.
조직을 대조염색(산성 에오신 용액)에 담그면 염기성 세포질 단백질과 세포외 기질에 분홍색이 부여됩니다. 슬라이드를 알코올로 세척하여 과도한 에오신을 제거합니다. 더 나은 현미경 검사를 위해 조직을 자일렌에 담그면 조직이 투명하게 됩니다.
현미경으로 보면 결장 절편이 악화된 조직 손상을 보여 DSS 유발 대장염을 나타냅니다.
분리된 결장 조직의 헤마톡실린 및 에오신 염색을 위해 다음날 아침 샘플의 냉동 보호를 위해 개별 15밀리리터 튜브에서 밤새 PBS의 30% 자당에 조직 조각을 담급니다. 다음날 조직을 최적의 절단 온도 또는 OCT 컴파운드에 포획하고 OCT가 굳을 때까지 조직을 섭씨 영하 20도에서 냉각합니다.
OCT 블록을 극저온 조절기에 넣고 두께 다이얼을 12마이크로미터로 설정한 다음 12마이크로미터 두께의 냉동 절편을 슬라이스하여 유리 현미경 슬라이드에 수집합니다. 모든 조직이 절편되면 슬라이드를 핫 플레이트에서 섭씨 65도에서 20분 동안 데우고 가열된 절편을 증류수로 잠시 세척한 후 헤마트톡실린 염색액으로 5분 동안 염색합니다.
흐르는 수돗물에서 5분 동안 여분의 헤마트실린 용액을 제거하고 에탄올에 0.5% 염산을 30초 동안 넣어 절편을 구별한 후 흐르는 수돗물에 1분 동안 헹굽니다. 그런 다음 샘플을 PBS에서 1분 동안 세척한 다음 흐르는 수돗물로 5분 동안 다시 세척합니다.
세척이 끝나면 조직을 오름차순 에탄올 계열에 담근 후 2분 동안 에오신에 역염색합니다. 샘플의 탈수를 위해 슬라이드를 95% 에탄올과 100% 에탄올을 2회 교체하여 침지당 5분 동안 담근 다음 자일렌에 5분 동안 2회 교체하여 청소합니다. 그런 다음 각 실험 그룹의 근위부, 중간 및 원위 결장에 대한 조직 손상에 점수를 매깁니다.