숙주-미생물총(Microbiota) 상호작용을 연구하기 위한 생체 외 장기 배양 시스템

숙주와 장내 미생물군 사이의 생체 외 상호 작용을 연구하려면 특정 장내 집락 박테리아가 없는 쥐 결장 조직부터 시작합니다. 배지로 조직을 세척하여 대변을 제거하고 적절한 배지가 포함된 멀티웰 플레이트로 옮깁니다.

동시에 다중 웰, 생체 외 장 장기 배양 장치를 조립합니다.

장치의 각 웰은 두 개의 쌍을 이루는 입력 및 출력 포트로 구성되며, 첫 번째는 결장 내강에 연결되고 두 번째는 조직 생존력을 유지하기 위해 웰에 배지를 지속적으로 공급합니다.

조직을 장치로 옮깁니다. 결장의 근위 및 원위 끝을 첫 번째 입력 및 출력 포트 쌍에 연결합니다. 결장 내강으로 내강 자극제 흐름을 시작하고 우물로 중간 흐름을 시작합니다.

각성제에는 점액층 분해 효소를 분비하는 장내 집락 박테리아가 포함되어 있어 밑에 있는 상피 세포에 부착할 수 있습니다. 이는 상주 수지상 세포가 상피 세포 사이의 수상돌기를 확장하여 박테리아 항원을 포획하고 특정 면역 반응을 생성하도록 유발하는 신호 전달 캐스케이드를 활성화합니다.

결과적으로 나이브 CD4+ T 세포는 Th17 세포로 분화합니다.

Th17 세포는 침입하는 병원체와 싸우고 장 장벽의 무결성을 유지하기 위해 다른 면역 세포를 활성화하는 전염증성 사이토카인을 생성합니다.

시작하려면 뭉툭한 끝 바늘을 장치 금형 내의 적절한 위치에 삽입하고 장치와 뚜껑 한 세트에 대해 약 20g의 폴리디메틸실록산 또는 PDMS 혼합물을 주조합니다. 금형을 진공 챔버에 30분 동안 넣어 PDMS 혼합물에서 기포를 제거한 다음 금형을 섭씨 55도에서 밤새 배양하여 PDMS 중합을 완료합니다.

PDMS가 설정되면 금형에서 바늘을 빼내고 플라스틱 금형에서 배양 장치와 뚜껑을 조심스럽게 분리합니다. 수술용 칼날을 사용하여 웰 윤곽선에서 PDMS 잔류물을 제거합니다.

무독성 실리콘 접착제를 사용하여 장치 덮개의 PDMS 장치를 75 x 50mm 마이크로슬라이드 덮개 유리에 부착하고 부품을 밤새 고정시킵니다. 장치의 매끄러운 면에 접착제를 바르십시오. 루멘용 22게이지 바늘 12개와 우물용 18게이지 바늘 12개를 삽입합니다. 실리콘을 사용하여 모든 바늘을 제자리에 고정하고 밤새 고정시킵니다.

입력 주사기를 퍼지하고 웰 매체가 모든 튜브에서 폐유리로 흘러나오는지 확인합니다. 그런 다음 입력 주사기를 퍼지하고 자극이 모든 튜브에서 폐유리로 흘러나오는지 확인하면서 다양한 자극을 오염시키지 않도록 주의하십시오.

쥐를 희생한